Modificación dirigida del genoma de AgMNPV

CHRISTINA B. MCCARTHY; E. I. ARANA; A. SCIOCCO-CAP; VICTOR ROMANOWSKI

Tandil

Congreso; XXIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología, División de la Asociación Argentina de Microbiología; 2003

Sociedad Argentina de Virología, División de la Asociación Argentina de Microbiología

Los baculovirus sólo infectan artrópodos, en su mayoría, insectos del Orden Lepidoptera. Se caracterizan por producir dos fenotipos de diferentes a lo largo del ciclo de infección: viriones brotantes y viriones incluidos en una matriz proteica. Estos últimos son de formas poliédricas y se acumulan en el núcleo de las células dando lugar a la denominación Nucleopoliedrovirus, que identifica a uno de los géneros de la familia Baculoviridae. El nucleopoliedro-virus de Anticarsia gemmatalis (AgMNPV) se aplica anualmente en Brasil en más de un millón de hectáreas de soja para el control de la ?oruga de las leguminosas?. Sin embargo, su uso está limitado por su baja velocidad de acción, especialmente en regiones más templadas. En este contexto, nos propusimos incrementar la eficiencia del virus silvestre mediante cambios dirigidos en el genoma sin incluir genes de toxinas. Debido al gran tamaño del genoma viral, la introducción de cambios se basa en la recombinación homóloga in vivo entre un plásmido de transferencia que contiene el gen heterólogo a insertar, flanqueado por secuencias virales, y DNA viral circular. Para incrementar la eficiencia en la recuperación de recombinantes, se diseñó una estrategia que consiste en la linealización del DNA viral previo a la co-transfección. De esta manera, la recircularización del DNA viral se logra únicamente mediante la recombinación con el plásmido de transferencia, generando así sólo progenie viral recombinante (rAgMNPV). Con ese fin, se incorporaron sitios de restricción únicos en el genoma de AgMNPV, optimizándose así la frecuencia de generación de virus recombinantes. Por otra parte, se finalizó con la construcción de un vector de transferencia de segunda generación (pIERUPOD) para la producción de recombinantes que expresen poliedrina (la proteína mayoritaria de los cuerpos de inclusión) y enhancin1 de LdMNPV (metaloproteasa capaz de desorganizar la membrana peritrófica de los insectos), seguido de una proteína fluorescente roja (DsRed). Una vez obtenido el virus recombinante, se analizará la expresión de los genes enhancin y DsRed1 y se estudiarán los efectos producidos por la infección de los rAgMNPV sobre la especie blanco y otras especies potencialmente permisivas.