Suplementación temprana de BMP5 al medio de cultivo embrionario y su efecto en el desarrollo in vitro y la expresión de genes de embriones bovinos

GARCIA, ELINA V.; RIZO, GABRIELA; VALDECANTOS, PABLO A.; MICELI, DORA C.; BARRERA, DANIEL

Buenos Aires

Congreso; II Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias; 2014

Sociedad Argentina de Tecnologías Embrionarias (SATE)

Las moléculas oviductales juegan un rol clave en la comunicación materno-embrionaria. En estudios previos demostramos que la proteína morfogenética ósea 5 (BMP5) se expresa diferencialmente en la región del istmo del oviducto bovino y está presente en el fluido oviductal (García y col. 2014, Theriogenology, 81: 1032-41). Sin embargo, se desconoce la acción de este factor durante el desarrollo embrionario temprano. El objetivo de este trabajo fue incorporar BMP5 durante las primeras etapas del cultivo in vitro de embriones bovinos y evaluar su efecto a nivel del desarrollo y de la expresión de genes asociados a la vía de BMPs (ID2) e implicados en el desarrollo embrionario [OCT4, NANOG, SOX2 (pluripotencia) y DNMT1, DNMT3A, DNMT3B (metilación del ADN)]. Ovocitos bovinos, obtenidos de ovarios provenientes de frigorífico, fueron madurados y fecundados in vitro. Los presuntos cigotos se cultivaron en medio CR1aa libre de suero (38,5 °C, 5% CO2) bajo 3 tratamientos: I) sin suplementación; II) suplementado con el vehículo de disolución del factor (HCl 0,04 mM) y III) suplementado con BMP5 (100 ng/ml). A las 48 hpi se evaluó la tasa de clivaje y los embriones se transfirieron a medio CR1aa + 10% SFB para continuar el cultivo. En los días 7 y 8 pi se registró el número de blastocistos desarrollados. Pooles de embriones de 2, 4, 8 células y blastocistos derivados del cultivo inicial en ausencia y presencia de BMP5 fueron colectados para el posterior análisis de la expresión de genes mediante RT-qPCR. Los datos de desarrollo se analizaron estadísticamente por el test de Fisher (P menor a 0,05) y los de expresión génica por ANOVA y test de Tukey (P menor a 0,05). A pesar que la incorporación de BMP5 al medio de cultivo no produjo diferencias significativas en la tasa de segmentación de los embriones respecto a los controles sin suplementación [I: 76,9% (n=286), II: 70,9% (n=158), III: 74,6% (n=279); 5 réplicas], el número de embriones clivados que alcanzaron el estadio de blastocisto fue significativamente mayor en los lotes experimentales cultivados en presencia de BMP5 [I: 28,2%, II: 26,8%, III: 38,9%; 5 réplicas]. Los resultados de RT-qPCR mostraron que la incorporación de BMP5 durante las primeras etapas del cultivo produce variaciones en la abundancia relativa de algunos de los transcriptos analizados, en determinados estadios del desarrollo. En presencia de BMP5 se observó un incremento significativo en la abundancia relativa de los transcriptos SOX2, DNMT1 y DNMT3B en embriones de 2 células, ID2 y OCT4 en 8 células y NANOG, OCT4 y DNMT1 en blastocistos respecto a los controles. Estos resultados demuestran que la incorporación temprana de BMP5 al medio de cultivo incrementa el número de embriones que llegan a blastocisto y afecta la expresión de genes que son fundamentales para el desarrollo y calidad del embrión, sugiriendo que BMP5 pueda cumplir un importante rol durante el desarrollo preimplantacional en bovinos.