ESTANDARIZACIÓN DE LA TÉCNICA DE PCR PARA LA DETECCIÓN DE TOXOPLASMA GONDII EN MUESTRAS DE SANGRE DE ANIMALES DE INTERÉS PRODUCTIVO DE LA PROVINCIA SALTA

GARCIA, EV; PINTOS, L; BURGOS ZAMUDIO, MJ; GARCIA RIOS, I; BARRERA, AD; BINDA, JA; SANCHEZ NEGRETTE, O

Salta

Encuentro; III Encuentro de la Red Internacional Universitaria para el Desarrollo de la Investigación y las Publicaciones Científicas (ERII) y XVII Jornadas de Investigación, Desarrollo e Innovación de UCASAL.; 2023

La toxoplasmosis es una zoonosis transmitida por el parásito Toxoplasma gondii que afectaa casi un tercio de la población humana mundial. En pequeños rumiantes (ovejas y cabras)produce abortos o nacimientos de crías débiles, ocasionando pérdidas económicas. Eldiagnóstico de esta infección es principalmente por métodos serológicos, sin embargo, aveces no se logra un diagnóstico temprano y certero. Bajo este contexto, las técnicas debiología molecular permiten la detección directa del ADN del parásito y no dependen delestado inmune del huésped. Considerando esto, el objetivo del presente estudio fueestandarizar la técnica de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la deteccióntemprana de Toxoplasma gondii en muestras de sangre obtenidas a partir de animales deinterés productivo provenientes de la provincia de Salta. Se obtuvieron un total de 200muestras de suero y sangre entera de caprinos y bovinos provenientes de diferentes unidadesproductivas familiares ubicadas en el departamento de Rivadavia. Para la validación delmétodo de extracción de ADN, se procesaron 40 muestras de sangre con el High Pure PCRTemplate Preparation Kit (Roche). Mediante lectura espectrofotométrica, se determinó la concentración y pureza de los ADN extraídos, y por electroforesis en gel de agarosa al 2%se evaluó su integridad. Como control de extracción se amplificó por PCR un gen endógeno(ACTB) del ADN del hospedador. Posteriormente, se procedió a la validación de loscebadores y a la puesta a punto de la PCR para la detección de Toxoplasma gondii. Se trabajócon dos pares de cebadores reportados en bibliografía que amplifican los genes B1 y SAG1,y los mismos fueron sometidos a chequeos de gradiente de temperatura, especificidad ysensibilidad. Una vez estandarizadas las condiciones de amplificación, se llevaron a cabo lasreacciones de PCR en las diferentes muestras de ADN extraídas. Paralelamente, se realizaronanálisis serológicos por HAI-TOXO TEST (Wiener-Lab) en las muestras de sueropertenecientes a los mismos animales. Resultados: el kit empleado permitió una extraccióneficiente de ADN genómico a partir de las muestras de sangre alcanzando una concentraciónpromedio >50 ng/ul en el 55% de las muestras y >100 ng/ul en el 34% de las muestrasprocesadas. Sumado a esto, el 95% de las muestras de ADN obtenidas alcanzaron índices depureza e integridad óptimos y mostraron amplificación del gen control ACTB. Los resultadosserológicos fueron: 8 animales positivos, 19 animales negativos y 11 animales dudosos o coninfección incipiente. De los animales positivos por HAI, 2 fueron positivos por PCR; de losnegativos, 5 fueron positivos por PCR y de los dudosos, 5 fueron positivos por PCR. Losresultados de este estudio demuestran que la técnica de PCR resulta ser de gran utilidaddiagnóstica como técnica complementaria y principalmente en situaciones tales comoinfecciones primarias (agudas) o reactivaciones, en las que el diagnóstico serológico no llegaa ser concluyente. Esto resulta de gran utilidad, permitiendo intervenir en situacionesconcretas de los rodeos a fin de evitar pérdidas productivas y la continuidad del ciclo delparásito.