Maduración de células dendríticas humanas: su modulación por el sistema colinérgico

SALAMOTE, GABRIELA; NAHMOD, KAREN; GABI, E; JANCIC, CAROLINA; AMARAL, MARÍA MARTA; FUXMAN, JUAN; GABELLONI, MARÍA LAURA; VERMEULEN, MÓNICA; GEFFNER, JORGE

La Falda

Congreso; 56 Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología y 11 Jornada Científica del Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

Acetilcolina (Ach) es el neurotransmisor por excelencia del sistema colinérgico. Media su acción a través de dos diferentes sistemas de receptores, los receptores muscarínicos (mAChR) y los receptores nicotínicos (nAChR). Previamente describimos la presencia de receptores muscarínicos en células dendríticas humanas (CD). Aquí, analizamos el impacto de la ACh en la fisiología de las CD. Los monocitos fueron purificados a partir de sangre periférica de dadores sanos no fumadores, por selección positiva con el kit de CD14 MicroBeads de Miltenyi (% pureza >95). Fueron diferenciados a CD por cultivo con GM-CSF + IL-4 por 6 días. En el presente trabajo identificamos por Western Blot la presencia de acetiltransferasa (AChT), la enzima que cataliza la síntesís de ACh, en CD. Encontramos una alta expresión de esta enzima en CD inmaduras, disminuyendo su intensidad en CD maduradas por tratamiento con LPS 0.5Jig/ml durante 24hs. Analizamos luego la posible influencia del sistema colínérgico en la maduración fenotípica de las CD y en su capacidad de producir IL-12. Empleamos ACh (10 nM), muscarina (100 nM), como agonista selectivo de los receptores muscarínicos, y neostigmina (10JiM). un inhibidor de la degradación de ACh. En todos los casos las CD fueron incubadas con LPS 0.5Jig/ml durante 24hs, en ausencia o presencia de ACh, muscarina o neostigmina. El fenotipo de las CD fue analizado por citometría de flujo. Ninguno de los compuestos ensayados afectó el incremento en la expresión de CD86, CD83 y CCR7 inducida por LP.S.Observamos, en relación a la expresión de HLA-DR, una disminución significativa en la intensidad media de fluorescencia inducida tanto por ACh (% inhibición del incremento inducido por LPS = 29 ± 5 %, n =6), muscarina (% inhibición = 35 ± 5, n=6) como por neostigmina (% nhibición = 28 ± 6, n=6) (p<0.05 en todos los casos). Al analizar la producción de IL-12p70 por ELISA, encontramos una disminución superior al 50% para los tres compuestos ensayados. Los valores de producción de IL-12 fueron de 5691 ± 568, 2114 ± 747, 2008 ± 539 y 1911 ± 624 pg/ml, para CD tratadas con LPS, en ausencia o presencia de ACh, muscarina y neostigmina, respectivamente (media ± ES, n = 4, p<0.05 al comparar LPS sólo vs LPS en presencia de ACh, muscarina o neostigmina). Nuestros resultados confirman la presencia de un loop autócrino/parácrino mediado por ACh capaz de modular el proceso de maduración de las CD.