Análisis de los mecanismos a través de los cuales la histamina promueve la presentación cruzada de antígenos solubles

AMARAL, MARÍA MARTA; ALVAREZ, CAROLINA; JANCIC, CAROLINA; BORGE, MERCEDES; NANNINI, PAULA; GABELLONI,MARÍA LAURA; GEFFNER, JORGE; VERMEULEN, MÓNICA

La Falda

Congreso; 56 Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología y 11 Jornada Científica del Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

Previamente demostramos que la histamina (His) potencia la presentación cruzada de ovalbúmina soluble (OVA), pero no particulada, por las células dendríticas (CDs) murinas. El objetivo de este trabajo consistió en analizar los posibles mecanismos responsables de este incremento. Las CDs murinas fueron obtenidas de precursores de médula ósea de ratones C57BL/6 tratados por 9 días con GM-CSF. En primera instancia, analizamos si el tratamiento con His resultaba en una degradación diferencial del antígeno endocitado. Las CDs fueron tratadas, o no, con His 0,1µM durante 30 min a 37°C, y luego fueron expuestas a OVA (100 μM) por 30 min. Se obtuvieron los extractos celulares y se evaluó la generación de péptidos derivados de OVA por la técnica de Western Blot, mediante el empleo de anticuerpos específicos. Encontramos que el tratamiento con His resultó en una degradación incrementada de OVA del 30 ± 5 % (n=7, p<0.05), en comparación con las CDs controles. Atendiendo a que el aumento en la capacidad de las CDs de mediar el fenómeno de presentación cruzada ha sido asociado con valores incrementados de pH en el compartimento endosomal, analizamos si la His era capaz de mediar este efecto. Con este objeto, empleamos el agente marcador Lysotracker, que se acumula en el compartimento endosomal y permite evidenciar cambios en los valores de pH, ya que disminuye la emisión de fluorescencia en la medida que se incrementa la alcalinidad endosomal. Las CDs fueron preincubadas con Lysotracker por 30 min a 37ºC, posteriormente lavadas e incubadas, o no, con His 0,1µM. Observamos que aquellas CDs tratadas con His mostraron una intensidad media de fluorescencia 15 ± 4 % inferior a la expresada por las CDs controles (media ± ES, n = 5, p<0.05), sugiriendo que la His incrementa el pH del compartimento endosomal. Estos valores incrementados de pH endosomal podrían ejercer un efecto protector sobre la degradación del antígeno presente en este compartimento, facilitando de este modo su ingreso a las vías de presentación cruzada.