Activación del potencial citotóxico de células dendríticas plasmacitoides por valores acídicos de pH extracelular

RODRIGUES RODRIGUES, CHRISTIAN; REMES LENICOV, FEDERICO; CEBALLOS, ANA; SABATTÉ, JUAN; JANCIC, CAROLINA; CABRINI, MERCEDES; SALOMÓN, HORACIO; GEFFNER, JORGE

La Falda

Congreso; 56 Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología y 11 Jornada Científica del Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

Las células dendríticas plasmacitoides (CDp) juegan un papel crítico en la inmunidad anti-viral, gracias a su capacidad de producir cantidades extraordinariamente elevadas de interferones de tipo I en las etapas agudas del proceso infeccioso. Previamente demostramos que la exposición a valores acídicos de pH extracelular resultaba en la activación de CD mieloides. Aquí, analizamos si la funcionalidad de las CDp era afectada por valores acídicos de pH extracelular. Las CDp fueron purificadas a partir de sangre periférica por gradientes de Ficoll-Hypaque y selección positiva por anticuerpos anti-BDCA-4 inmovilizados a perlas magnéticas (Miltenyi). En experiencias preliminares observamos, llamativamente, que la exposición de las CDp a pH 6.5 resultaba en la adquisición de una notable actividad citotóxica. A fin de analizar este punto, las CDp junto a células SupT1 (línea T CD4+), en una relación 1:2, fueron expuestas por 90 min a 37ºC a pH 6.5 o pH 7.3 (controles). Se neutralizó luego el pH del medio, incubándose la suspensión celular por un período adicional de 18 h a 37ºC. Se evaluó luego la viabilidad celular, por citometría de flujo, realizando un gate en la región correspondiente a células SupT1 viables. Observamos que las CDp no expuestas a pH 6.5 fueron incapaces de mediar una respuesta citotóxica: % citotoxicidad = 15 ± 10 (n=5). Por el contrario, las CDp previamente expuestas a pH 6.5 mediaron un potente efecto citotóxico = % citotoxicidad 64 ± 15 (n=5). A fin de analizar si el efecto citotóxico era mediado por liberación de factores solubles, colectamos sobrenadantes de CDp incubadas por 90 min a 37ºC a pH 6.5 y luego por 18 h a pH 7.3. Estos sobrenadantes mediaron un claro efecto citotóxico sobre las células SupT1 (% citotoxicidad = 42 ± 7, n=3). No se observó efecto citotóxico al ensayar sobrenadantes colectados de CDp incubados por 18 hs a pH 7.3. Considerando que las CDp son capaces de mediar respuestas citotóxicas mediadas por TRAIL, analizamos la capacidad de un anticuerpo bloqueante anti-TRAIL (clon RIG-1) de inhibir la citotoxicidad. Este anticuerpo (5 µg/ml) inhibió en más de un 60% el efecto citotóxico mediado tanto por las CDp como también por los sobrenadantes colectados de CDp expuestas a pH 6.5 (n=3, p<0.05). Nuestros resultados indican que, a diferencia de lo observado previamente para CD mieloides, la exposición transitoria a valores acídicos de pH extracelular pone en marcha poderosos mecanismos citotóxicos mediados por CDp.