Mecanismos responsables de la transinfección de células dendríticas por HIV-1 mediada por espermatozoides

REMES-LENICOV, FEDERICO; RODRÍGUEZ RODRIGUES, CHRISTIAN; SABATTÉ, JUAN; RADIEN, SILVINA; CABRINI, MERECEDES; JANCIC, CAROLINA; PASQUALINI, RODOLFO A; QUINTANS, C; MARIN-BRIGGILER, CLARA; VASQUEZ-LEVIN, MÓNICA; GEFFNER, JORGE; CEBALLOS, ANA

La Falda

Congreso; 56 Reunión de la Sociedad Argentina de Inmunología y 11 Jornada Científica del Grupo Rioplatense de Citometría de Flujo; 2008

Sociedad Argentina de Inmunología

La transmisión sexual del HIV-1 representa la principal vía de diseminación de la infección por HIV-1, siendo el semen su principal vector de transmisión. Previamente, demostramos que los espermatozoides son capaces de transinfectar células dendríticas (CD) con HIV-1. En el presente trabajo, analizamos los posibles mecanismos involucrados. Las CD se obtuvieron a partir de monocitos de sangre periférica con GM-CSF + IL-4. Los espermatozoides fueron purificados por swim up de dadores no infectados. Los espermatozoides (1,5 x 106/ 100 ul) fueron incubados por 60 min a 37ºC con HIV BAL (40 ng p24), lavados 4 veces e incubados con CDs en una relación de 10:1. A los 7 día de cultivo se observó la infección de las CDs, evidenciada por los altos valores de p24 (medido por ELISA) presentes en los sobrenadantes (7.2 ± 6 ng/ml, media ± ES, n=5 p<0.01). Seguidamente, demostramos que a fin de transmitir el HIV-1 a las CDs es requerido el contacto entre espermatozoides y CD. Cuando ambos tipos celulares se hallan separados por un filtro que impide su contacto, la transinfección no se efectiviza, 0.3 ± 0.05 vs 6.8 ± 0.6 media ± ES, n=5 p<0.01 espermatozoides separados por filtro vs espermatozoides:CD, respectivamente. En otro grupo de experiencias, se marcaron los espermatozoides con el colorante fluorescente CSFE (Carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester) y se incubaron con CD marcadas con un anticuerpo PE-anti-HLA-DR 45 min a 37ºC. Se analizó el fenómeno interactivo por microscopía de fluorescencia. Llamativamente, encontramos que el 80 ± 9 % de las CDs mostraron asociarse con al menos 1 espermatozoide, siendo el número promedio de espermatozoides asociados a cada CD de 3.7 ± 1.7 (n=6 p<0.01). Por microscopía confocal se observó que una fracción de los espermatozoides es internalizada por las CDs. Posteriormente nos preguntamos cómo afecta la interacción con el espermatozoide el perfil fenotípico de las CDs. Mediante citometría de flujo observamos que dicha interacción resultó en la maduración fenotípica de las CD: el % células CD83+ se incrementó de 12 +/-5 a 82 +/- 15% (n=5, p< 0.05), mientras que la expresión de HLA-DR (MFI: 112 ± 16 vs 478 ± 35,  n=5, p< 0.05) y CD86 (MFI: 45 +/- 11 vs 139 +/- 17,  n=5, p< 0.05), mostró también importantes incrementos. Los resultados presentados indican que los espermatozoides son capaces de transmitir eficientemente el HIV-1 a las CDs a través de un proceso que requiere del contacto célula/célula, promoviendo la diseminación de la infección.