Análisis biofísico de la interacción de receptores activantes de células Natural Killer (NK) con ligandos del hospedador y virales.

PABLO ROMASANTA; NICOLAS URTASUN; ALEXANDRA M. TARGOVNIK; JULIETA FERNANDEZ LYNCH; MARÍA V. MIRANDA; MARISA M. FERNANDEZ; EMILIO MALCHIODI

San Miguel de Tucumán

Otro; LIX Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI); 2011

Sociedad Argentina de Inmunología

Las células NK están reguladas por receptores inhibitorios y activantes que reconocen moléculas CMH-I y análogas no propias en células infectadas o tumorales. En ratones, los receptores NK pertenecen a la familia Ly49. Ly49H es un receptor activante que al interaccionar con m157, proteína análoga a MHC-I codificada por citomegalovirus murino (MCMV), activa cascadas intracelulares que eliminan la célula infectada. Otra estrategia para la restricción viral es el reconocimiento mediante Ly49P activante de células infectadas que coexpresan el haplotipo H2Dk y la proteína m04 (modifica MHC-I) de MCMV. El objetivo de este trabajo es estudiar la cinética y termodinámica de interacción de Ly49s con moléculas propias (H2Dk) y codificadas por MCMV (m157) mediante resonancia plasmática de superficie empleando BIAcore. Para ello, Ly49P, Ly49H y H2Dk conteniendo el péptido DRSLRLPAR de MCMV se clonaron y expresaron en E. coli BL21 como cuerpos de inclusión y se replegaron in vitro. Las proteínas purificadas rindieron ~1 mg/litro cultivo. m157 se clonó y expresó en baculovirus y se purificó por columna Ni2+/NTA. Las Ly49 fueron orientadas en el chip CM5 de Biacore, mediante biotinilación sitio-específica en su región N-terminal. La cupla Ly49P-H2Dk interacciona con una KD=12 μM, la que se encuentra dentro del rango descripto para las Ly49 inhibitorias. La interacción Ly49H-m157 se analizó entre 10 y 25°C para determinar parámetros termodinámicos. Se obtuvo KD=1.5 μM, ΔH= -12 kJ/mol, ΔS=69 J/Kmol y ΔG= -33 kJ/mol. La cupla Ly49H-m157 tiene alta afinidad y cinética lenta, comparada con otras Ly49 interaccionando con MHC-I. Sin embargo, la KD es 10 órdenes de magnitud mayor que la obtenida con la cupla inhibitoria Ly49I-m157 (KD=166 nM). Estos resultados indican que a pesar de que el receptor activador Ly49H reconoce a m157 con una afinidad menor que el inhibitorio Ly49I, esta interacción sería suficiente para activar células NK generando resistencia a la infección por MCMV.