Estudio de la expresión in vitro de variantes del gen IGFALS halladas en niños con deficiencia de ALS (ALS-D) o con talla baja idiopática (TBI)

MARTUCCI, LUCIA; SCAGLIA, PAULA; GUTIERREZ, MARIANA; KARABATAS, LILIANA; REY, RODOLFO; DOMENE, HORACIO; DOMENE, SABINA; JASPER, HECTOR

Mar del Plata

Congreso; Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC); 2015

Introducción: La subunidad ácido-lábil (ALS) forma junto a IGF-I e IGFBP-3 complejos ternarios (CT), prolongando la vida media del IGFI circulante. Niños con ALS-D, con ambos alelos mutados, presentan reducción severa de los niveles séricos de IGF-I e IGFBP-3 y retraso leve a moderado del crecimiento. Familiares portadores heterocigotos de estas mutaciones, poseen valores de IGFs intermedios entre ALSD y no portadores, sugiriendo un efecto de dosis génica. Objetivo: Para caracterizar el efecto de variantes del gen IGFALS sobre la síntesis, secreción y función de la ALS, se expresaron in vitro 13 variantes (p.E35Kfs*87, p.E35Gfs*17, p.L213F, p.N276S, p.R277H, p.P287L, p.A330D, p.L409F, p.A475V, p.R493H, p.C540R, p.S490W y p.R548W) halladas en niños ALS-D y/o TBI (heterocigotos) y se evaluó su capacidad de ser secretadas y de formar CT in vitro.Métodos: Las variantes del gen IGFALS se obtuvieron por mutagénesis dirigida. Se transfectaron células CHO con IGFALS salvaje (WT) o con las variantes. Se detecto ALS en los lisados celulares (LC) y medios condicionados (MC) por Western inmunoblot (WIB) y en MC por ELISA. La formación de CT de las variantes se evaluó incubando MC con 125I-IGF-I e IGFBP-3 y posterior cromatografía de exclusión molecular. Resultados: WIB muestran que: a) p.R277H, p.P287L, p.A330D, p.A475V, p.R493H y p.R548W se detectan en LC y MC; b) p.E35Kfs*87, p.E35Gfs*17, p.N276S, p.L409F, p.S490W y p.C540R no se observan en LC ni MC y c) p.L213F se visualiza solo en LC. Al determinar ALS por ELISA en CM los niveles de p.A330D secretada fueron significativamente menores que WT-ALS (p