El 17b-estradiol a traves del REa estimula la translocacion del REa endogeno intracelular a la membrana plasmatica y activa la via PKC/ERK1/2 en celulas adenohipofisarias normales

GUTIERREZ, S.; SOSA LDEL, V.; PETITI, JP; MUKDSI, J. H.; CAMBIASO, M J; DE PAUL, A L; TORRES, AI

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC).; 2011

En continuacion con investigaciones previas en las que demostramos que la actividad secretoria y proliferativa de celulas adenohipofisarias es regulada por E2 con la participacion RE de membrana, nos propusimos analizar la modulacion de los diferentes pooles de RE por accion del 17b-estradiol (E2) en adenohipofisis. Cultivos primarios adenohipofisarios de rata hembra se trataron con 10 nM de E2 y con un agonista del REa (PPT) por 0, 5, 15 y 30min. Se inmunomarco el REa mediante microscopia electronica (ME, tecnica de celulas intactas) y confocal (MC), citometria de flujo (FACS, en celulas sin permeabilizar) y por western blot (WB, por biotinilacion de proteinas de superficie). Ademas, se detecto la activacion de de PKC (por MC) y de ERK1/2 (por WB). Analisis estadastico ANOVA-Fisher. Nuestros resultados muestran la presencia del REa en la membrana plasmatica de lactotropas, gonadotropas y somatotropas por inmunomarcacion con ME. Mediante biotinilacion de proteinas de superficie se detecto el full-length del REa (66 KDa) en la fraccion del pellet (proteinas de membrana) siendo esta expresion incrementada por E2 y PPT, en el sobrenadante (proteinas intracelulares) se observo ademas una isoforma de 55 KDa. Mediante MC el REa fue identificado en nucleo y citoplasma y luego de la estimulacion con E2 o PPT fue detectado ademas en la membrana plasmatica, colocalizando con el marcador de membrana Concanavalin A. El 7.7% =/-0.6 de lactotropas expresaron REa en la superficie mediante FACS, incrementando 23.0 +/-2.1 % la intensidad de fluorescencia luego del tratamiento con E2. A partir de los 5 min de estimulo con E2 o PPT se detecto activacion de la via PKC/ERK1/2. Nuestros resultados demuestran que el REa esta localizado en la superficie de celulas adenohipofisarias normales sugiriendo que el E2 a traves del REa estimula la translocacion del REa endogeno intracelular a la membrana plasmatica.