La vía mitocondrial ADX-ADXR-P450 es esencial para el desarrollo gametofítico en A. thaliana.

SETZES N, DISTEFANO A, BELLIDO A, FIOL DF, ZABALETA E, PAGNUSSAT GC.

Chascomus

Taller; IV Taller de Biología Celular y del Desarrollo; 2018

Las plantas que se reproducen sexualmente alternan entre dos generaciones: gametofito y esporofito. Los gametofitos cons=tuyen estructuras haploides que poseen un rol clave en la reproducción sexual, dado que en ellos se especifican las gametas necesarias para la fecundación. En nuestro laboratorio, hemos iden=ficado y estudiado mutantes de Arabidopsis thaliana con una inserción en genes nucleares que codifican tanto para una adrenodoxina (ADX) como para una adrenodoxina reductasa (ADXR), ambas mitocondriales. En mitocondrias de insectos y mamíferos, ADX par=cipa de una transferencia de electrones desde NADPH hacia ADXR y finalmente, hasta un citocromo P450 (P450), una vía que cons=tuye un paso clave en la síntesis de hormonas esteroideas. A su vez, gracias a ensayos de complementación bimolecular de la fluorescencia (BIFC) y a estudios de doble híbrido (Y2H), hemos establecido que cuatro P450s de Arabidopsis (CYP711A1, CYP90A1, CYP75B1, CYP71B9) interactúan con ADX1. También hemos demostrado que estos P450s poseen localización mitocondrial mediante experimentos de co ? localización realizados en N. benthamiana. Aun así, mutantes nulas para estos P450s no muestran defectos gametoá=cos, posiblemente debido a un fenómeno de redundancia funcional. Para corroborar esto, realizamos cruces con el fin de obtener mutantes dobles y encontramos que la mutante doble hemicigota para CYP711A1 y CYP90A1 mostró un 25% de semillas abortadas, un número que da cuenta de un defecto gametoá=co. Analizamos sacos embrionarios provenientes de esta mutante mediante microscopia DIC y encontramos defectos en el desarrollo similares a aquellos observados en mutantes ADXR. Por úl=mo, estudiamos los patrones de expresión de ambos P450s mediante el uso de líneas reporteras con GFP y/o GUS.