Transformación de Eragrostis curvula mediada por Agrobacterium tumefaciens

TERENTI ROMERO, C. ; DIAZ, A.R; BREZNEC, A; DIAZ PALEO, A; ECHENIQUE, V.

Congreso; Congreso Latinoamericano de Genetica; 2012

Eragrostis curvula (Schrad.) Nees es una gramínea perenne megatérmica. Esta monocotiledónea es resistente a la sequia y por ello es una forrajera de importancia para regiones semiáridas, siendo su principal limitación la calidad del forraje. Debido a que presenta un modo reproductivo apomíctico que limita el uso de métodos convencionales de mejoramiento la transgenesis de E. curvula es una técnica alternativa para la producción de pasturas con propiedades mejoradas. En el presente trabajo se probaron diferentes protocolos de transformación mediada por A. tumefaciens como sistema natural para producir plantas transgénicas. En los experimentos ensayados se utilizaron distintos explantos (semillas maduras, embriones, yemas apicales y callos) provenientes de dos cultivares de E. curvula, Tanganyika (apomictico obligado) y Kromdraii (apomictico facultativo). Se emplearon cepas bacterianas que difieren en la capacidad de virulencia (AGL0 y AGL1), ambas portando el mismo vector binario dotado de un gen reportero (uidA) y un gen de selección (bar) bajo los promotores Ubi1 y Act1, respectivamente. Las plantas que resistieron dos rondas de selección del herbicida L-phosphinothricin (PPT) (basados en la mínima concentración inhibitoria del agente selectivo determinada para esta especie vegetal) fueron evaluadas por PCR para la presencia del gen uidA en el genoma vegetal. Las plantas PCR positivas fueron posteriormente analizadas por la técnica de Southern blot para confirmar y determinar el número de copias incorporadas.