Activación de Caspasa-3 por Anticuerpos Anti-muscarínicos en el Síndrome de Sjögren

SILVIA REINA, LEONOR STERIN-BORDA, DANIELA PASSAFARO, ENRI BORDA

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; LIII Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2009

En las glándulas salivales de pacientes con Síndrome de Sjögren primario (SSp) se reportó una sobre-expresión de enzimas reguladoras del fenómeno apoptótico (FA), sugiriendo su participación en a la patogénesis del daño glandular en la enfermedad autoinmune. El objetivo de este trabajo fue investigar si los anticuerpos anti muscarínicos de pacientes con SSp disparan el FA en una línea celular A-253 del epitelio glandular salival humano. Por cultivo celular de la línea glandular humana A-253, por transferencia terminal de deoxinucleótidos (TUNEL) estudiamos la fragmentación del ADN y mediante la medición de la actividad de la caspasa-3 estudiamos la vía del FA. Se utilizó una inmunoglobulina G antipéptido M3 (IgG-M3), purificada por afinidad en presencia del péptido sintético correspondiente al 2do dominio extracelular del mAChR humano. La IgG-M3 fue capaz de incrementar el FA en las células A-253 de una manera concentración y tiempo dependiente (600% ± 50, n=8), siendo la concentración máxima de 1x10-9M en 48 hs. La IgG normal (10 ± 2, n=7) o la fracción no anti-péptido (7 ± 1, n=8) no mostraron efecto en el sistema estudiado. La IgG-M3 indujo el clivaje y la activación de la caspasa-3 (1.52 ± 0.07, n=8), al igual que el agonista pilocarpina (0.07 ± 0.06). En ambos casos el 4-DAMP (1x10-7M) (0.05 ± 0.004) y el péptido M3 (1x10-7M) (0.05 ± 0.002) inhibieron la acción de la IgG-M3 sobre el FA, sin ser modificado por el péptido no relacionado. La activación de la caspasa-3 inducida por la IgG-M3 fue bloqueada por inhibidor de la fosfolipasa C [U-73122 (5x10-6M)] (0.04 ± 0.002), el inhibidor de la de la calcio-calmodulina [W-7 (5x10-6M)] (0.06 ± 0.004) y por el inhibidor del flujo de calcio [verapamilo (5x10-6M)] (0.07 ± 0.005). Nuestros resultados sugieren que los Ac IgG-M3 presentes en el SSp, tienen la capacidad de incrementar el FA en las células epiteliales glandulares de manera caspasa-dependiente y mediante la activación del sistema enzimático acoplado a los mAChR.