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Introducción Las enfermedades infecciosas que cursan con diarrea y neumonía representan los principales problemas sanitarios en terneros de tambo criados artificialmente. Las mismas suelen producir cuantiosas pérdidas económicas. Por ello, el diagnóstico etiológico es de suma importancia para seleccionar un tratamiento adecuado y decidir las medidas preventivas a implementar. El objetivo de este estudio fue identificar los agentes infecciosos asociados a un brote de diarrea y enfermedad respiratoria en terneros de tambo. Materiales y métodos La crianza artificial en un tambo del partido de Balcarce (Provincia de Buenos Aires), contaba con 33 terneros Holando Argentino (8-30 días de vida) alimentados con leche y balanceado comercial. De un total de 16 animales con diarrea (n: 10), con diarrea y tratados con antibiótico (n: 2), sin diarrea (n: 4) y con descarga nasal mucopurulenta (n: 9) se tomaron muestras de materia fecal (n: 16) e hisopados nasales en medios Hank´s (n: 14) y Amies (n: 6) para estudios virológicos y bacteriológicos, respectivamente. Los estudios virológicos incluyeron ELISA indirecto de captura policlonal para detección de rotavirus bovino grupo A (RVB-A) en materia fecal y ELISA indirecto de captura monoclonal para detección de coronavirus bovino (CoVB) en materia fecal e hisopados nasales. Las muestras positivas a RVB-A fueron analizadas por RT-PCR heminested multiplex para determinar el genotipo G y P. Además, los hisopados nasales fueron analizados para HVB y vDVB por aislamiento viral e identificación por IFD. El diagnóstico de criptosporidiosis se realizó en 6 muestras de materia fecal (4 terneros con diarrea y 2 sin diarrea) por extendido y tinción de Ziehl Neelsen modificada. Para la búsqueda de Salmonella, las materias fecales se cultivaron por siembra directa en agar MacConkey y XLD. Además se hicieron tres pooles a los cuales se les realizó un enriquecimiento selectivo en caldo tetrationato con tres repiques en agar XLD a las 24, 72 y 120 horas. Las colonias sospechosas de Salmonella se identificaron bioquímicamente por las pruebas de rutina, así mismo se les realizó antibiograma por el método de Kirby-Bauer y serotipificación. El cultivo y aislamiento de Escherichia coli (E. coli) se realizó en agar MacConkey a 37 °C por 18-24 horas. Luego, se estudió el perfil de genes que codifican para algunos factores de virulencia siguiendo la metodología de Blanco y cols. A partir de la zona de crecimiento confluente de cada placa se extrajo el ADN por ebullición. El templado obtenido fue utilizado para la amplificación por PCR con primers específicos para F5, F17, F41, LT, STa y STb (de E. coli enterotoxigénica; ETEC), intimina (de E. coli de adherencia y borrado; AEEC), F17 y Pap (de E. coli septicémica SEPEC y asociada a diarrea). Los hisopados nasales se cultivaron en agar Sangre Columbia y MacConkey y se incubaron en atmósfera con 10 % de dióxido de carbono a 37°C. Los aislamientos bacterianos fueron identificados por pruebas bioquímicas y se les realizó antibiograma. Resultados De los agentes virales evaluados, sólo se detectó RVB-A genotipo G6Hun4-like P[11] en 1 ternero con diarrea (1/12; 8,3%). Por otra parte, Cryptosporidium spp. fue hallado en 2 terneros tratados con antibiótico: 1 con diarrea (1/4; 25%) y 1 sin diarrea (1/2; 50%). Salmonella Tiphymurium fue aislada de 2 animales diarreicos (2/12; 16,6%) y de 2 sin diarrea (2/4; 50%). No se detectaron genes para ETEC en ninguno de los terneros. Sin embargo, se identificaron genes u operones que codifican para F17 (3/12; 25%), F17 + Pap (1/12; 8,3%), Pap + intimina (1/12; 8,3%) en terneros con diarrea y F17 (1/4; 25%), intimina (1/4; 25%) y Pap (1/4; 25%) en animales sin diarrea. De las infecciones mixtas en terneros con diarrea, la de mayor relevancia fue RVB-A G6 Hun4-like P[11] asociado a E. coli positivo a Pap + intimina. En 5 animales con diarrea (41,6%) no se identificó ninguno de los agentes evaluados. En los hisopados nasales se aisló Mannheimia haemolytica (1/6; 16,6%), Pasteurella multocida + Arcanobacterium pyogenes + E. coli (1/6; 16,6%) y Arcanobacterium pyogenes (1/6; 16,6%). El crecimiento confluente de la E. coli aislada resultó positivo a Pap. El antibiograma de S. Tiphymurium mostró sensibilidad a la amoxicilina/ác. clavulánico, ampicilina, cefaclor, gentamicina, enrofloxacina y florfenicol. Sin embargo hubo resistencia a la tilmicosina y oxitetraciclina. Con respecto a los aislamientos de P. multocida y M. haemolytica, éstos fueron sensibles a ampicilina, estreptomicina, florfenicol y oxitetraciclina. Discusión La etiología de la diarrea neonatal de los terneros es compleja y multifactorial, por ello es fundamental utilizar diferentes técnicas de laboratorio que permitan arribar a un diagnóstico. Aún así, muchos estudios no han podido determinar la etiología en un 20% a 56% de las muestras evaluadas. En el presente estudio se identificaron algunas de las causas de diarrea en terneros. En los tambos de nuestro país, RVB-A genotipo G6 Hun4-like P[11] es el genotipo predominante y Cryptosporidium spp tiene elevada prevalencia de 23,8%. Con respecto a S. Typhimurium, este serovar es uno de los más frecuentes en terneros y parece predominar en los tambos de nuestra zona. En este estudio, la infección por S. Typhimurium estuvo o no asociada a la diarrea; diferentes trabajos han demostrado que la infección por Salmonella puede no asociarse a enfermedad en algunos establecimientos. En cuanto a los genes de virulencia de E. coli encontrados, la detección de F17 sin asociación a otros genes es un hallazgo frecuente en terneros con diarrea. Sin embargo, aún no está claro el rol patogénico de estas cepas. De todos modos, esta fimbria suele estar asociada a la citotoxina CNF2, la cual no fue evaluada en este estudio. Es relevante la detección de los genes para fimbria Pap e intimina (eaeA) en los terneros con diarrea. La fimbria Pap se ha encontrado en cepas aisladas de terneros con diarrea y septicemia, además de estar frecuentemente asociada a la fimbria F17c y a la adhesina afimbrial CS31A. La intimina es una proteína presente en cepas de E. coli que causan lesiones de adherencia y borrado (AECC) y diarrea en terneros. Estas cepas pueden pertenecer a los patotipos EHEC o EPEC, dependiendo de la combinación de la intimina (eaeA) con otros factores de virulencia y de los serotipos identificados. Finalmente, en los terneros con signos de enfermedad respiratoria (descarga nasal mucopurulenta) fue posible aislar P. multocida, M. haemolityca y A. pyogenes. Estas bacterias suelen causar neumonía en terneros, pero también son habitantes normales del tracto respiratorio superior. Por ello, para una correcta interpretación del significado clínico de los aislamientos bacterianos en animales vivos sería aconsejable realizar lavado broncoalveolar. Bibliografía Bertin Y, Girardeau J-P, Darfeville-Michaud A, Martin C. 2000. Epidemiological Study of pap Genes among Diarrheagenic or Septicemic Escherichia coli Strains Producing CS31A and F17 Adhesins and Characterization of Pap31A Fimbriae. J. Clin. Microbiol. 38: 1502-1509.

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