VHH de llama anti-VP6 de Rotavirus puede utilizarse como herramienta diagnóstica, neutraliza la infección in vitro y confiere protección parcial contra la diarrea por Rotavirus in vivo.

GARAICOECHEA, LORENA; OLICHON, AURELIEN; MARCOPPIDO, GISELA; WIGDOROVICH, ANDRES; MOSGOVOJ, MARINA; SURREY, THOMAS; PARREÑO, VIVIANA

Vaquerias, Cordoba

Jornada; XXVIIº Jornadas Científicas Anuales SAV; 2007

Sociedad Argentina de Virologia - AAM

Las llamas (Lama glama) poseen anticuerpos que carecen de cadenas livianas; el dominio hipervariable de estos anticuerpos se denomina VHH ( 15kDa). Los VHH pueden clonarse, expresarse y utilizarse como reactivos de alta pureza y calidad. Rotavirus (RV) es la principal causa de diarrea en humanos y animales de corta edad. Su genoma, 11 segmentos RNAdc, esta rodeado por una triple cápside proteica: la cápside interna constituida por la proteína VP2, la intermedia compuesta por la proteína VP6 y la cápside externa formada por las proteínas VP7 y VP4. La proteína VP6 se dispone en trímeros, es conservada dentro de los RV grupo A por lo que suele utilizarse como blanco en el diagnostico virológico, pero no induce anticuerpos neutralizantes; por otro lado las proteínas VP4 y VP7 inducen anticuerpos neutralizantes pero son altamente variables (clasifican a RV en 26 P tipos y 16 G tipos respectivamente). El objetivo de este trabajo fue obtener VHH dirigidos contra la proteína VP6 de Rotavirus para utilizarlos como herramienta diagnóstica y evaluar si por su tamaño pequeño poseían (a diferencia de los anticuerpos convencionales) actividad neutralizante de la infección viral independientemente de los G y P tipos.Para ello se inmunizó una llama con VP6 de RV expresada en baculovirus. Se construyó una biblioteca de anticuerpos VHH y mediante el sistema de display en fagos, se seleccionaron clones positivos de los cuales se eligieron 4 para estudios posteriores. Se evaluó la especificidad de los VHH hacia VP6 de RV por ELISA y WB. Se construyeron VHH bivalentes con el objeto de mejorar su utilización en el diagnóstico. Se evaluó la capacidad de los VHH de neutralizar la infección por RV de diferentes G y P tipos in vitro y finalmente se realizó un ensayo en el modelo ratón lactante para evaluar protección contra la diarrea por RV. Los resultados de WB indican que los VHH reconocen específicamente la proteína VP6 de RV grupo A, especialmente en su estado trimérico y por ELISA se demostró que los VHH reconocen la VP6 de cepas de RV que poseen diferentes combinaciones G/P-tipo. Se logró mejorar los VHH como herramienta diagnóstica por medio de construcciones bivalentes que permiten su pegado directo a placas de ELISA, evitando el uso de un anticuerpo de captura del VHH. Se pudo comprobar que 3 de los 4 VHH ensayados inhiben la infección por cepas de RV de distinto G y P tipo, in vitro; mientras que uno de ellos también protege parcialmente contra la diarrea (60% protección) en el modelo ratón lactante. Los VHH anti VP6 de Rotavirus constituyen herramientas potenciales de inmunidad pasiva para proteger la diarrea por RV independientemente de los genotipos.