Validación de ELISA IBR para detección de anticuerpos contra BoHV-1 en bovinos y cobayos bajo normas ISO-17025.

ROMERA, ALEJANDRA; PARREÑO, VIVIANA; MAKEK, LUCIA; RODRIGUEZ, DANIELA; MALACARI, DARIO; MAIDANA, SILVINA; COMPAIRED, DIEGO; LÓPEZ, VIRGINIA; MARANGUNICH, LAURA

Buenos Aires

Congreso; IX Congreso Argentino de Virología; 2008

Sociedad Argentina de Virologia, SAV

La validación del ensayo para identificar sueros de bovinos y de cobayos positivos y negativos para anticuerpos (Acs) contra IBR se estableció mediante el cálculo de su especificidad (EsP) y Sensibilidad (SeD) diagnósticas, utilizando un set de muestras positivas y negativas definidas como población de referencia. Se calculó su especificidad y sensibilidad relativas (EsR y SeR) respecto de la seroneutralización, considerada como técnica Gold Standard. A su vez se calculó la correlación entre el título de Acs neutralizantes y el título de Acs por ELISA mediante un análisis de regresión lineal. También se calculó la repetibilidad y la linealidad.Materiales y MetodosCobayos: Se utilizaron 263 sueros de cobayos, 128 sueros de vacunados con vacunas experimentales y vacunas oleosas o acuosas disponibles en el mercado que contienen BoHV-1 en su formulación (n:13). Se utilizaron 135 sueros de cobayos negativos. Bovinos: Para determinar la correlación entre título de Acs por ELISA y título Acs neutralizantes se evaluaron 412 sueros de bovinos prevacunación y posvacunación (60dpv) con vacunas oleosas conteniendo BoHV-1 en su formulación. Previamente para determinar el punto de corte (PC), la sensibilidad y la especificidad, se habían evaluado 39 sueros positivos y 93 sueros negativos a BoHV-1. Respecto del IBR ELISA Bovino cuyo PC se habia establecido en 40% la SeR y EsR fueron 89.74 y 100%. Los ensayos para calcular la repetitibilidad con corridas históricas del control positivo C+ y otras especialmente diseñadas para esta validación arrojó un 5.8% de variación relativa del C+ dentro de una misma placa, de 13.8% entre placas dentro de un mismo ensayo y la variación entre ensayos realizados en diferentes días representó un 18.2% de la variación relativa total que fue del 23,6%. Existe buena correlación entre título de Ac neutralizantes y el título de Ac determinado por el IBR ELISA (Coef Pearson: 0.72; R2: 0.85) para el suero de un mismo individuo obtenido a los 60 dpv. Se comprobó que el método se comporta en forma lineal,Respecto del IBR ELISA Cobayo se estableció el PC en 37-39% arrojando una sensibilidad y especificidad diagnóstica del 99%. Existe una muy buena correlación entre título de Ac neutralizantes y el título de Ac determinado por el IBR ELISA (Coef Pearson: 0.92; R2: 0.83) para el suero de un mismo individuo obtenido a los 30 dpv. La precisión total del ensayo es de 23% resultando un 9.3% de la variación total la debida a las repeticiones del control en una misma placa, 17.3% entre placas de un mismo ensayo y 9.3% entre ensayos de diferentes días. Se confirmó que el método se comporta en forma lineal.Se logró establecer el PC para el IBR ELISA cobayo y el PC previamente establecido para el IBR ELISA bovino se utilizó para determinar la repetitibilidad del ensayo en corridas históricas y otras diseñadas para este estudio.Se calcularon las EsR y SeR del IBR ELISA cobayo y se recalcularon con mayor n las EsR y SeR del IBR ELISA bovino.En ambos casos existe una buena correlación entre título de Acs neutralizantes y totales determinado por el IBR ELISA específico. La bondad del ajuste lineal es sostenible confirmando que el método se comporta en forma lineal al efectuar diluciones.La repetitibilidad de ambos IBR ELISA tuvo un coeficiente de variación del 23% que se encuentra dentro de los valores aceptables por la OIE para los ensayos de ELISA.De acuerdo a estos resultados consideramos que el IBR ELISA cobayo funciona en forma óptima para el control de vacunas que contienen BoHV-1 en su formulación, asi mismo el IBR ELISA bovino es eficaz tanto en la detección de bovinos infectados como vacunados con BoHV-1.