OBTENCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE NANOANTICUERPOS CONTRA EL VIRUS DE

ZAMIT, ANA LAURA; PERCORA, ANDREA; PEREZA GUIRREBURUALDE, MS; MALACARI, DARIO; GARAICOECHEA, LORENA; PARREÑO, VIVIANA; WIGDOROVICH, ANDRES; ROMERA, ALEJANDRA

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual SAV; 2009

SAV-AAM

Dentro del género Pestivirus, los Virus de la Diarrea Viral Bovina (BVDV) I y II producen grandes pérdidas económicas en la industria ganadera a nivel mundial. La estrategia de control más empleada consiste en la vacunación del rodeo junto a la eliminación de animales persistentemente infectados. Sin embargo, la eficacia de las vacunas se ve limitada por la extensa variabilidad de la proteína inmunodominante y principal blanco de los anticuerpos neutralizantes de BVDV, denominada E2. En el contexto de la respuesta humoral contra BVDV, abordamos el estudio de epitopes presentes en la E2 mediante una biblioteca de fagos que expresan nanoanticuerpos de llama, conocidos como VHHs. En un trabajo previo realizamos la construcción de la biblioteca inmune contra la E2 de BVDV. En el presente trabajo, mostramos la obtención y caracterización de VHHs capaces de reconocer la E2 de distintos aislamientos de BVDV. Metodología A partir de la biblioteca construida, se realizaron 4 rondas de enriquecimiento en condiciones de estringencia crecientes. Luego se evaluaron 288 clones mediante ELISA-fago, y se secuenciaron 14 de ellos. Finalmente se seleccionaron 3 clones, cuyos VHHs fueron expresados en forma soluble y purificados. Los VHHs solubles fueron ensayados mediante Seroneutralización contra la cepa homóloga y ELISA de captura contra diversos aislamientos, y se evaluó por western blot si los epitopes reconocidos eran lineales. Asimismo, se caracterizaron los VHHs mediante herramientas bioinformáticas: propiedades físico-químicas, numeración del IMGT y Colliers de PerlesColliers de Perles