Diagnóstico molecular de Norovirus en ganado bovino mediante RT-PCR.

FERRAGUT, FATIMA; BADARACCO, ALEJANDRA; MIÑO, SAMUEL; MAUORY, AXEL; THIRY, ETIENE; BARRANDEGUY, MARIA; PARREÑO, VIVIANA

Cordoba

Jornada; XXXI Jornadas SAV; 2012

SAV-AAM

Los Norovirus (NoV) pertenecen a la familia Caliciviridae. Son virus desnudos de simetría icosaédrica (T=3) y poseen un genoma de RNA simple cadena, lineal, de polaridad positiva. Norovirus constituye uno de los principales agentes causantes de gastroenteritis epidémica no bacteriana en humanos, bovinos, porcinos y otras especies animales. En nuestro país, en particular, se carece de información sobre la incidencia de la infección por este virus en el ganado bovino. Los objetivos de este trabajo fueron: i) estandarizar una RT-PCR para detectar NoV bovino, ii) diagnosticar la presencia de NoV en muestras de materia fecal de ganado bovino argentino, iii) realizar la caracterización molecular de las cepas de NoV detectadas y estudiar la dinámica poblacional de los NoV circulantes en bovinos de Argentina, utilizando herramientas bioinformáticas. Hasta el momento, se analizaron un total de 70 muestras de materia fecal, provenientes de rodeos de tambo de Buenos Aires (n=51) y Santa Fe (n= 19), recolectadas entre los años 2008 a 2012. Se realizó la extracción de ARN utilizando un kit comercial de QIAGEN. Luego, mediante una RT-PCR de un solo paso (One-step RT-PCR), utilizando los primers CBECu F/R, se amplificó la región de la ARN polimerasa (ORF1). De las muestras positivas por RT-PCR, se llevó a cabo la purificación de ADN y la secuenciación del fragmento amplificado. Del total de muestras analizadas, 9 resultaron positivas por RT-PCR, de las cuales, dos fueron confirmadas por secuenciación. Se realizaron análisis filogenéticos utilizando el fragmento de la Polimerasa obtenido por RT-PCR mediante el método de Neighbor Joining, con los modelos de sustitución nucleotídica Kimura 2 Parameter y Maximum Composite Likelihood. En los árboles filogenéticos obtenidos, ambas cepas se encontraron relacionadas a cepas del Genogrupo III. Una de las cepas agrupó con cepas pertenecientes al Genotipo 1 y la otra al Genotipo 2. Actualmente, se está intentando llevar a cabo la amplificación de la región del genoma que codifica para la proteína VP1 de la cápside (ORF2), para poder realizar con ello la genotipificación de las cepas encontradas.              Según nuestro conocimiento, este es el primer reporte de la detección de NoV en muestras de materia fecal de bovinos de Argentina.