Desarrollo de Bibliotecas de Anticuerpos Monoclonales de Llama (VHH) para la caracterización de Norovirus Genotipos GI.1 y GII.4

BOK, MARINA; GARAICOECHEA, LORENA; WIGDOROVICH, ANDRES; BOK, KARIN; PARREÑO, VIVIANA

Huerta Grande, Córdoba, Argentina

Jornada; XXIX Reunión Científica Anual SAV; 2009

SAV-AAM

Los Norovirus son la mayor causa de gastroenteritis epidémica no bacteriana en adultos. En la actualidad, el diagnostico se realiza mediante las técnicas de PCR o ELISA usando partículas virales vacías (PVVs), ya que no existe un sistema de cultivo para Norovirus. El desarrollo de anticuerpos monoclonales recombinantes de llamas (VHH) a partir de bibliotecas anti- GI.1 (Norwalk-1968) y GII.4 (MD-2004) permitirá su caracterización antigénica. Se inmunizaron 2 llamas, con 3 dosis de 300 µg cada una, de PVVs de los genotipos GI.1 y GII.4. Una llama no inmunizada fue utilizada como control. La respuesta de IgG sérica fue seguida semanalmente por ELISA y las células secretoras de anticuerpos (CSAc) se evaluaron a los 4 y 7 días post inmunización (dpi) por ELISPOT. La llama inmunizada con PVVs GI.1 desarrolló una fuerte respuesta hacia el antígeno homólogo (1/600000, 35 dpi), mientras que presentó una respuesta moderada a las PVVs GII.4 (1/1000, 28 dpi). La llama inmunizada con PVVs GII.4 presento una respuesta similar con un alto titulo hacia el antígeno homólogo (1/800000) y una seroconversión moderada a las PVVs GI.1 (1/10000, 28 dpi). Luego de la segunda inmunización (28 dpi), la llama inmunizada con GI.1 presentó 1583 y 900 CSAc antígeno específicas (GI.1) al día 4 y 7 pi, respectivamente. En la llama inmunizada con GII.4, se cuantificaron 100 CSAc a 4 dpi. Los resultados parciales obtenidos indican que las llamas fueron inmunizadas correctamente con ambas PVVs, respondiendo con altos títulos de anticuerpos y CSAc contra su antígeno específico y contra el otro genotipo estudiado. La respuesta de anticuerpos y CSAc demuestra un reconocimiento del antígeno que permitirá el posterior desarrollo de la biblioteca. Se realizó una tercera inmunización a los 90 dpi, aislando los linfocitos del día 4 pi final, para desarrollar la biblioteca de VHH, actualmente en curso. La identificación de anticuerpos específicos de genotipo y con reacción cruzada permitirá la caracterización en detalle de epitopes en la cápside de norovirus, que en el futuro podrían ser utilizados en estrategias de prevención y control de la enfermedad.