EXPRESIÓN SIMULTÁNEA DE LOS GENES PARA LA GREEN FLUORESCENT PROTEIN Y EL PÉPTIDO TÍMICO TIMULINA UTILIZANDO UN SISTEMA ADENOVIRAL BIDIRECCIONAL REGULABLE TET-OFF

POCH B; COSTA MI; REGGIANI PC

Ciudad del Este

Jornada; XIX Jornadas de jóvenes investigadores.; 2011

Asociación de universidades grupo Montevideo (AUGM).

Introducción Una de las cuestiones clave en la implementación exitosa de terapias génicas radica en la capacidad de regular la expresión consistentemente. Con este propósito, y a fin de ampliar nuestros estudios en timulina y su papel en el desarrollo del eje hipotálamo-hipófiso-ovárico, construimos un sistema bivectorial regulable Tet-Off que expresa, simultáneamente, los transgenes para green fluorescent protein (GFP) y metFTS (análogo biológicamente activo de timulina).   Objetivos Estudiar la funcionalidad y regulabilidad de nuestro sistema in vitro y evaluar la expresión in vivo mediante su inyección en músculos y ventrículos cerebrales de ratas.   Materiales y métodos El sistema consta de dos vectores adenovirales: 1)     RAd-(GFP-TRE-FTS)bidir, unidad de respuesta en la cual la transcripción de los transgenes se encuentra controlada por un promotor bidireccional inducible por doxiciclina (DOX); 2)     RAd-tTA, unidad transactivadora que expresa la proteína regulatoria tTA. La expresión de GFP se determinó por observación microscópica y medición de intensidad de fluorescencia en un fluorómetro. La timulina bioactiva fue medida por un bioensayo de rosetas.   Resultados y conclusión El sistema construido mostró ser activo tanto en experimentos in vitro, donde células CHO-K1 incubadas con ambos RAds mostraron una eficiente expresión de los transgenes, pudiendo inhibirse por el agregado de DOX al medio de cultivo; como in vivo, donde se dosaron niveles significativamente aumentados de timulina sérica y en LCR en ratas inyectadas intramuscular e intracerebrovectricularmente con ambos RAds, respectivamente.   La utilización del gen de la GFP en nuestro sistema sirvió para comprobar, sencilla y rápidamente, la transcripción del gen de la timulina.