Construcción de una secuencia de ADN codificante para la hormona tímica timulina

REGGIANI P; RIMOLDI O; HEREÑÚ C; SOSA Y; BROWN O; PLÉAU J-M; DARDENNE M; GOYA R

Mar del Plata

Congreso; Congreso Conjunto Sociedades Biomédicas: SAIC-SAI-SAFE-SAB-SAB-SAN-SAF; 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La timulina (FTS), una hormona tímica involucrada en la diferenciaciónintra y extratímica de las células T, ejerce una acción facilitadora sobrela secreción hormonal de la pituitaria anterior y administrada en ratonesatímicos restaura ciertas funciones de las células T. No ha sido posibleclonar su gen, lo cual obstaculizó la exploración de los mecanismosmoleculares que participan en las acciones de la timulina. OBJETIVO:Diseñar y construir una secuencia sintética de ADN codificante para unanálogo biológicamente activo de timulina. El oligonucleótido doble hebrasintético codificante para timulina fué insertado en el vector deexpresión pCDNA3.1, con el cual se transfectaron dos líneas celulares, HEK293 y BHK. Se obtuvieron sobrenadantes y lisados celulares de ambas líneascon los que se realizó un bioensayo de formación de rosetas para timulina:los lisados poseían niveles de FTS de 1.200 ng/ml en las células HEK 293 y450 ng/ml en las BHK, y sus sobrenadantes poseían 300 y 130 ng/mlrespectivamente. Lisados y sobrenadantes de células transfectadas con elplásmido vacío (controles) no mostraron actividad de FTS. La inyeccioni.p. (50 ul/animal) de los lisados de ambas líneas en ratonestimectomizados (FTS sérica no detectable) indujo la aparición de nivelesséricos de FTS detectables (150 fg/ml). Contrariamente, los lisadoscontroles no indujeron niveles séricos detectables de FTS. La incubaciónde lisados de ambas líneas transfectadas con un suero policlonal anti-FTSredujo un 90% la actividad de FTS, un antisuero contra un antígenoirrelevante no causó disminución en la actividad de FTS. CONCLUSION: Laactividad biológica detectada en los lisados de células transfectadas conel pcDNA3.1-FTS es producida por un factor con identidad inmunoquímica detimulina. La futura inserción de este oligonucleótido sintético envectores de expresión apropiados permitirá realizar terapia génica enanimales timo-deficientes.