La terapia génica intramuscular con timulina restaura el comportamiento y la memoria en un modelo de Enfermedad de Alzheimer esporádica en rata.

LÓPEZ HANOTTE J; PERALTA F; POSADA JI; VIDAL ESCOBEDO AA; ZAPPA VILLAR MF; PARDO J; REGGIANI PC

La Plata

Jornada; Jornada de Investigación 2022.; 2023

Facultad de Ciencias Médicas, UNLP.

Introducción: La enfermedad de Alzheimer esporádica (EAe) se caracteriza clínicamente por una progresiva pérdida de memoria, deterioro cognitivo y cambios de personalidad. A nivel neuropatológico se observa muerte neuronal, neuritas distróficas, ovillos neurofibrilares intracelulares de la proteína tau hiperfosforilada y placas neuríticas extracelulares compuestas principalmente de fibrillas insolubles del péptido amiloide β. Asimismo, la neuroinflamación crónica se asocia con la patogénesis de la EA. Con el fin de estudiar y explorar terapias para la EA hemos puesto a punto un modelo EAe por medio de la administración de estreptozotocina (STZ) intracerebroventricular (icv) en ratas y hemos observado en el hipocampo cerebral, a 25 días y 3 meses post-STZ, un aumento de la microglía y astrocitos reactivos. Nuestro objetivo general es desarrollar estrategias terapéuticas que permitan prevenir y/o subsanar los efectos perjudiciales de la inflamación cerebral característica de la EA. La timulina, un nonapéptido tímico que ejerce diversas acciones sobre el sistema inmune, ha mostrado ejercer una acción antiinflamatoria a nivel central, periférico y local. Previamente diseñamos un gen sintético para timulina (gen metFTS), construimos un vector adenoviral, el RAd-FTS, y demostramos la prolongada expresión de timulina en el parénquima cerebral y en músculo esquelético.Objetivo: Evaluar el potencial de la transferencia génica intramuscular de timulina para restaurar el comportamiento y la memoria deteriorada en ratas del modelo de EAe.Materiales y métodos: Vector adenoviral recombinante para timulina: Previamente construimos un RAd de primera generación, el RAd-FTS, que expresa constitutivamente nuestro gen metFTS. Este vector fue amplificado en células HEK293, purificado, alicuotado y titulado para su posterior uso. Animales: Se utilizaron ratas macho Sprague Dawley de 3 meses de edad. Test Comportamentales: •El test de enterramiento de canicas (marble burying, MB) que evalúa el enterramiento de bolitas y es utilizado para estudiar comportamiento típico de especie. •El test de campo abierto (Open Field, OFT) que permite evaluar sistemáticamente la exploración horizontal (crossing) y vertical (rearing) de un ambiente nuevo y el comportamiento símil ansiedad (acicalamiento=grooming). •El test de reconocimiento de objeto nuevo (Novel object Recognition, NOR) que evalúa la memoria de reconocimiento de objeto. •El test de nado forzado (Forced Swimming Test, FST) que evalúa el comportamiento símil depresivo. Diseño experimental: Las ratas se dividieron en 3 grupos experimentales (n=8), SHAM, STZ y TIM. En el Día experimental 0 los animales recibieron inyecciones bilaterales icv de líquido cefalorraquídeo artificial (SHAM) o 3mg/kg de STZ (grupos STZ y TIM). En la semana 1 y 6 los animales del grupo TIM recibieron una inyección intramuscular de RAd-FTS (108 pfu/rata). Antes del sacrificio se realizaron pruebas comportamentales para evaluar el comportamiento típico de especie (MB), la actividad exploratoria y el comportamiento símil ansiedad (OF), la memoria de reconocimiento de objeto nuevo (NOR), y el comportamiento símil depresión (FST). Finalmente, en la semana 11 se realizó el sacrificio de los animales mediante decapitación bajo anestesia; se extrajo el cerebro y un hemicerebro fue utilizado para disección mientras que el otro fue fijado en paraformaldehido al 4%. Resultados: En el estudio de terapia génica intramuscular de largo plazo con timulina, en animales del modelo de EAe, se observó que los animales que recibieron STZ mostraron un deterioro en los comportamientos típico de especie (P