INVESTIGADORES
TUBIO Gisela
congresos y reuniones científicas
Título:
Análisis del efecto de la temperatura sobre la estructura de xilanasas fúngicas en presencia de polietilenglicol de distintos pesos moleculares
Autor/es:
LOUREIRO, DANA B.; RASSETTO, NATALÍ; GALLUCCI, GEORGINA; MARCHISIO, FIORELA; TUBIO, GISELA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XV Congreso XXXIII Reunión Anual. Sociedad de Biología de Rosario; 2013
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
Las xilanasas (Xyl) son responsables de la
degradación del xilano, polisacárido mayoritario en la pared celular vegetal, y
son producidas por una gran cantidad de organismos, algunos de los cuales poseen
la capacidad de excretarlas al medio, lo que
facilita su obtención y posterior purificación. Técnicas de
bioseparación como los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) y la precipitación con
polielectrolitos (PPE) emplean polímeros de cadena flexible (PCF), por ello es
importante realizar estudios estructurales y funcionales de Xyl de diversas
fuentes en presencia de dichos polímeros, ya que, según su procedencia,
presentan diferentes características y conductas químicas. Dicroísmo Circular
(DC) es una técnica espectroscópica que proporciona información sobre la
estructura secundaria de las enzimas y de sus cambios conformacionales en presencia
de PCF, sale, temperatura, etc. El objetivo de este trabajo fue estudiar
el efecto de la temperatura sobre la estructura secundaria de Xyl de diversas
fuentes fúngicas (Thermomyces lanuginosus, Trichoderma viride y Aspergillus
niger) en ausencia y
presencia de polietilenglicol (PEG) de distintos pesos moleculares (PM), para
la posterior validación de técnicas de purificación que utilizan PCF. En un
espectropolarímetro Jasco J-810, se registraron espectros de DC entre 195 y 240nm
(UV lejano) luego de incubar la proteína durante 10 minutos a: 20, 40, 50, 60 y
70ºC, en
ausencia y presencia de PEG de diferentes PM (1000, 2000, 4600 y 8000) al 5%
P/P. La concentración final de proteína fue 0,23mM para Xyl de T. lanuginosus, 0,067μM para Xyl de T. viride y 1,3μM para Xyl de A. niger. Todos los espectros se
registraron a 20ºC
y se corrigieron por la contribución del control correspondiente (sin enzima). La
determinación de cada componente de estructura secundaria se efectuó con los
espectros convertidos a Elipticidad por Residuo Medio (ΘMRW), utilizando el
paquete informático CDPro compuesto por tres programas de cálculo CONTIN,
SELCON3 y CDSSTR y empleándose el grupo de referencia nº4. Los resultados obtenidos mostraron que las
tres Xyl exhiben el comportamiento típico de un patrón de lámina β con una banda positiva en 197?201nm y una
banda negativa en 215?225nm, característico de las glucosidasas estudiadas. Xyl
de T. viride mostró ser la más
sensible a la temperatura. El aumento de la temperatura por encima de 60°C indicó que de las tres
enzimas, la de T. lanuginosus, es la
mas estable. A altas temperaturas, la presencia de los polímeros no produjo
cambios significativos en los espectros de las enzimas, sugiriendo que la presencia
de los mismos no desestabiliza la estructura proteica. Por otra parte, la
presencia de PEG de PM 2000, 4600 y 8000 a 20°C no produjo modificaciones significativas
en los espectros de Xyl de T. lanuginosus
sugiriendo que en presencia de los polímeros mantiene la predominante forma de
lámina β. Los resultados obtenidos permiten concluir que la presencia de los
polímeros ensayados no afectó considerablemente la estructura secundaria de las
enzimas en estudio e indicando que los mismos pueden ser empleados en las
técnicas bioseparativas de extracción líquido-líquido con sistemas
bifásicos acuosos y precipitación con polielectrolitos.