ACEITES ESENCIALES QUÍMICAMENTE DIVERSIFICADOS CON HIDRACINA E HIDROXILAMINA: HACIA LA BÚSQUEDA DE NUEVOS ANTIMICOBACTERIANOS

CASALONGUE, MATIAS; RAMALLO, I AYELEN; GAGO, GABRIELA; GRAMAJO, HUGO; FURLAN, RICARDO

Rosario

Congreso; XXIII Congreso y XLI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario 2021; 2021

Sociedad de Biología de Rosario

La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa causada por bacterias del géneroMycobacterium. El control de la TB se ha dificultado por la falta de una vacuna efectiva,de diagnósticos rápidos y fundamentalmente por la emergencia de cepas de M.tuberculosis resistentes a múltiples fármacos. Todo esto ha convertido a la TB en una delas diez principales causas de muerte. Por lo tanto, existe una necesidad urgente dedesarrollar medicamentos con nuevos mecanismos de acción que puedan reducir laduración y la complejidad de las terapias actuales. Los productos naturales (PN) contienensubestructuras bioactivas que han sido validadas evolutivamente por la Naturaleza parainteraccionar con macromoléculas siendo excelentes puntos de partida para el diseño defármacos. La diversificación química de extractos (DQE) explota la diversidad deesqueletos de PNs a través de la producción de nuevas moléculas semisintéticasbioactivas a través de reacciones estratégicas. El presente trabajo se centra en el diseño ypreparación de mezclas semisintéticas por DQE mediante reacciones que incorporanfarmacóforos nitrogenados en estructuras de PNs, y en el posterior estudio de suspropiedades antimicobacterianas. Para tal fin, se realizó la modificación de 26 aceitesesenciales (AEs) con hidracina monohidrato e hidroxilamina clorhidrato en etanol areflujo generando 52 AEs modificados (AEMs). Se efectuó la búsqueda de moléculasantimicobacterianas mediante ensayo en microplaca de 96 pocillos empleando la cepamodelo no patógena M. smegmatis, teniendo como referencia a isoniacida. Se probaronlos AEMs por duplicado a 200 μg/mL (en DMSO) en un Middlebrook 7H9 suplementadocon glicerol y tiloxapol. Luego de 48 h de incubación a 37 °C, se analizó el crecimientocelular agregando el indicador resazurina. El 62% de los AEMs ensayados no mostrócrecimiento. Para seleccionar el mejor candidato para fraccionar cromatográficamente,dichos AEMs se analizaron por bioautografía de M. smegmatis a 100 µg/banda. Labioautografía es una herramienta que, al acoplar cromatografía en capa delgada con unensayo biológico, permite adjudicar la bioactividad observada en la mezcla a loscomponentes responsables de la misma antes de ser purificados. A pesar del número deAEMs que mostraron capacidad antimicobacteriana, solo 13 AEMs mostraron halos deinhibición de crecimiento ausentes en los extractos de partida, de los cuales 8 resultaronde la reacción con hidracina. De todos ellos el mejor candidato es el AEM de Vetiveriazizanioides (L.) Nash diversificado con hidracina. El mismo presenta un halo de inhibición interesante con bordes definidos a un Rf de 0.08 en DCM:MeOH (97:3). Enbase a estos resultados se continuará con la purificación del compuesto activo mediantetécnicas cromatográficas. Utilizando resonancia magnética nuclear y espectrometría demasa, se efectuará la identificación de la estructura activa, para finalmente arribar aestudios de cuantificación de la actividad biológica. Este trabajo demuestra el potencialde la DQE como generación de moléculas bioactivas, en especial de antimicobacterianos,satisfaciendo en parte la escasez de fuentes de quimiotipos novedosos para desarrollardrogas más eficientes.