Alternativa CLAE para cuantificar Ácido Valproico en muestras sintéticas y reales. Derivatización pre-columna y optimización mediante diseño experimental

TEMPORETTI I.A.; ETCHEVES C.; MAGGIO, R. M.; KAUFMAN, T. S.

La plata

Congreso; VIII Congreso Argentino de Química Analítica; 2015

Asociación Argentina de Química Analítica

El Ácido Valproico (AV) es un antiepiléptico clásico de segunda generación [1]. Su estrecho margen terapéutico y farmacocinética variable demandan el monitoreo terapéutico del fármaco. La determinación de AV es dificultosa debido a su carencia de cromóforos [2]. En este trabajo, se propone desarrollar una determinación de AV en suero mediante CLAE utilizando derivatización pre-columna con bromuro de 4-nitrofenacilo (BNF), y usando ácido ciclohexanocarboxílico (CHC) como estándar interno (EI), por tener similitud estructural con AV y reactividad química análoga.En una primera instancia se sintetizaron los derivados AV-BNF y CHC-BNF con el fin de obtener muestras de referencia y verificar la factibilidad de la derivatización. La caracterización estructural de éstos se llevó a cabo utilizando metodologías espectroscópicas (UV, IR, RMN). Se usó CLAE para determinar los tiempos de retención (tr) de los compuestos.Se realizó un diseño de experimentos (DOE) con el objeto minimizar trAV y maximizar la resolución AV-BNF/CHC-BNF, ajustando la composición de la fase móvil. Una vez establecido el procedimiento CLAE [Columna Luna C8, fase móvil (H2O:MeOH:ACN; 29:69:2, v/v/v), caudal 1,2 ml/min, trAV 10,2 min y trCHC 4,6 min], se procedió a optimizar la derivatización con muestras sintéticas y reales. Se realizó un DOE del procedimiento completo de derivatización, para optimizar las señales del analito y del estándar interno en los cromatogramas. Los valores óptimos para los factores evaluados fueron en: - Etapa 1: 200 l de muestra; EI en desproteinizante (CHC 50,4 ppm en 200 l ACN), desecante (NaSO4, 200 mg), y centrifugación (10 min, 3000 rpm);- Etapa 2: Sobrenadante de Etapa 1 (100 l), BNF (50 l, 876 ppm), TEA (50 l, 235 ppm), incubación (2 h, 60ºC) y centrifugación (10 min, 3000 rpm).Se realizó una validación global de la metodología, evaluando exactitud, precisión, linealidad, robustez y selectividad (contra posible medicación concomitante)