El factor de transcripción sigma32 de Brucella abortus: su identificación y evaluación de la contribución en la virulencia bacteriana.

CARRICA M; ROSSETTI O; CRAVERO S

Capital Federal

Jornada; Primera Jornada del Grupo de Microbiologia General de la Asociación Argentina de Microbiologia; 2002

Asociación Argentina de Microbiologia

En la naturaleza, las bacterias están expuestas a múltiples oscilaciones ambientales, respondiendo rápidamente en forma adaptativa a estos cambios, mediante inducción o represión de genes específicos. Las subunidades sigma de la RNA polimerasa son las responsables de dirigir en forma específica la iniciación de la transcripción, activando promotores. El factor sigma32 (32) ha sido caracterizado como un componente de la respuesta al choque térmico en Escherichia coli y otras bacterias. La bacteria gram negativa Brucella abortus es un patógeno intracelular facultativo capaz de replicar en células del sistema fagocítico-mononuclear de humanos y rumiantes causando brucelosis, una zoonosis difundida en todo el mundo. El objetivo del presente trabajo fué determinar si el factor 32 de Brucella abortus contribuye a la virulencia de esta bacteria. Mediante el análisis in silico del genoma de Brucella melitensis 16M se identificaron 2 marcos de lectura abiertos (llamados rpoH1 y rpoH2) que presentaron homología con la familia de genes rpoH que codifican para el factor de transcripción 32. Ambos marcos de lectura abiertos fueron amplificados a partir de ADN genómico de B. abortus S2308 mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y clonados en el vector pGEM-T. Mediante Northern blot se determinó que la transcripción de rpoH1 se incrementó ante un choque térmico. También rpoH1 fué capaz de complementar una mutación rpoH nula de E. coli. Para determinar la contribución a la virulencia, se construyó, por recombinación homóloga, la cepa B. abortus S2308 rpoH1. Analizando la virulencia en el modelo ratón, esta cepa presentó la misma cinética de infección que la cepa parental B. abortus S2308. En cambio rpoH2 no fué capaz de complementar la mutación rpoH nula en E. coli ni mostró cambios en el perfil de transcripción ante un choque térmico. La mutante de Brucella abortus S2308 rpoH2 también mostró la misma cinética de infección que la cepa parental Brucella abortus S2308. La doble mutante B. abortus S2308 rpoH1 rpoH2 no pudo ser obtenida. Se concluye de que rpoH1 posee funciones comunes a los componentes de la familia de activadores transcripcionales32 y que, al menos en el modelo ratón, ni rpoH1 ni rpoH2 participan en la modulación de la virulencia en Brucella abortus.