USO DE Brucella abortus PARA LA EXPRESIÓN DE ANTÍGENOS PROTECTIVOS DE PATÓGENOS DE INTERÉS VETERINARIO: RAPI DE Babesia bovis Y DE MSPIA DE Anaplasma marginale.

SABIO Y GARCÍA J; CARRICA M; FARBER M; CRAVERO S; ARESE A; CAMPOS E; ROSSETTI O

Capital Federal

Congreso; XVII Congreso latinoamericano de microbiologia y X congreso argentino de microbiologia; 2004

Asociación Argentina de Microbiologia

Brucella abortus, agente causal de la brucelosis bovina, es una bacteria gram negativa que sobrevive y se multiplica en células del sistema reticuloendotelial del hospedador. Las vacunas actualmente en uso para el ganado bovino son las cepas B. abortus S19 y RB51. La inmunidad protectiva es mediada por células, si bien hay también inducción de respuesta humoral. La babesiosis causada por el protozoario Babesia bovis y la anaplasmosis causada por la rickettsia Anaplasma marginale son enfermedades hemoparasitarias de los bovinos, transmitidas naturalmente por garrapatas, que causan anemia y muerte. Se requiere para la inducción de protección tanto de una respuesta humoral contra los antígenos de superficie como una respuesta celular. El uso de B. abortus S19 y RB51 como vectores de expresión heteróloga permitiría obtener una multivacuna B. abortus recombinante, capaz de conferir inmunidad no solo a brucelosis, sino también a las enfermedades provocadas por patógenos intracelulares. En este trabajo se generaron cepas B.abortus S19 y RB51 recombinantes que expresan las proteínas RAP1 de B. bovis y MSP1a de A. marginale, bajo distintos promotores y en distintas localizaciones subceluares. RAP1 contiene epitopes B y T conservados que no sufren variación antigénica. MSP1a es una proteína de superficie que induce protección frente al desafío con cepas homólogas y heterólogas. Los genes correspondientes fueron amplificados por PCR, completos o sin sus secuencias de anclaje a membrana, y clonados bajo distintos promotores y distintas secuencias señal con el fin de ensayar ubicaciones subcelulares diferentes para las proteínas heterólogas. Se utilizaron promotores de expresión constitutiva en Brucella y se incluyeron en algunas construcciones las secuencias Shine Delgarno y los primeros aminoácidos de la proteína periplásmica BP26 o la de membrana externa OMP19 de B. abortus. Se ensayó la estabilidad y la inmunogenicidad de las proteínas recombinantes en vectores replicativos o integrativos. El gen rap1 bajo el promotor lacz y como fusión a los primeros aminoácidos de -galactosidasa, en un vector replicativo, resultó en la expresión de RAP en la membrana interna de Brucella, probablemente utilizando como anclaje a membrana su propio péptido señal. En ratones BALB/c inmunizados con este plásmido se observó menor estabilidad del plásmido recombinante respecto del plásmido sin inserto. A pesar de ello se detectaron por Western blot anticuerpos específicos contra RAP a las 3 y 5 semanas post infección. La proteína MSPIa solo pudo ser expresada sin sus regiones transmembrana carboxi terminal, tanto en la fracción citoplasmática (en vector replicativo) como en el periplasma y membrana externa (en vectores integrativos). Las construcciones heterólogas resultaron estables en ratones inmunizados si bien no se pudieron detectar anticuerpos contra MSPIa por Western Blot. Se concluye entonces que es posible la expresión de RAP1 y MspIa en Brucella abortus de manera de obtener cepas recombinantes. Ensayos de inmunidad celular y subtipificación de anticuerpos se están llevando a cabo y permitirán obtener mayor información sobre la inmunogenicidad de las proteínas heterólogas expresadas.