Diseño de una vacuna oral contra la infección por virus sincitial respiratorio basada en partículas tipo virales

GARELLI SOFÍA; LUCIANA AGOSTINA FASSOLA; MARIANELA C. SERRADELL; GUILLERMO ALBRIEU-LLINÁS; LUCIA L RUPIL

Córdoba

Jornada; Reunión científica anual SAV 2022; 2022

AAM

El virus sincitial respiratorio (VSR) es el agente viral más común de las infecciones respiratorias enniños, causando hospitalizaciones y muertes. En la actualidad no existe una vacuna contra elmismo. Las vacunas de mucosas generan respuestas inmunes en mucosas que proveen protección en la primera línea de defensa del organismo. La administración oral es la vía de administración de fármacos más empleada, sin embargo, la biodisponibilidad de vacunas orales es limitada por la degradación por proteasas digestivas.Recientemente, desarrollamos una plataforma de vacunas de subunidad, basadas en partículastipo virales (VLP), que usa las propiedades de las proteínas variables de superficie (VSP) delparásito intestinal Giardia lamblia, resistencia a la degradación y pH extremos, para permitir suadministración oral. La inmunización oral de ratones con VLP quiméricas que conteníanhemaglutinina del virus de la influenza (HA) y VSP indujo una eficaz respuesta inmune que brindóprotección contra la infección con el virus y el desarrollo de tumores que expresaban HA.Este proyecto pretende desarrollar VLP que contengan antígenos de VSR y VSP, para permitir suadministración oral, y evaluar la seguridad y eficacia de las vacunas en ensayos preclínicos. Paraello, se diseñaron vectores que codifican a la proteína de fusión con mutaciones que estabilizan laconformación de prefusión (PreF) y la proteína de matriz (M) de VSR. Además se disponía de tresvectores que codifican diferentes VSP, con un dominio transmembrana (TM) y tallo citosólico deVSVG para permitir su incorporación en las partículas, y del plásmido que codifica a gag del virusde la leucemia murina (MLV-gag).Se comprobó la correcta expresión de las nuevas construcciones por inmunofluorescencia, lo cualnos condujo a la producción piloto de las partículas. En primera instancia se analizó la producciónde VLP compuestas por MLV-gag como proteína de matriz mediante transfección de células 293 ypurificación por ultracentrifugación en gradiente de sacarosa. El análisis por western blot indicóque se obtuvo un correcto pseudotipado con la proteína preF. A continuación se produjeron VLPcon preF y VSP, pero al transfectar células que expresaban establemente VSP1267, se obtuvieronpartículas compuestas por gag y VSP, pero sin preF. Posteriormente, al transfectar células queexpresaban gag, se obtuvieron partículas con preF pero sin VSP. Estos resultados indican que elensamblado de las VLP no se consiguió y que gag interacciona preferentemente con una de ellas,pero no las dos, o que se excluyen mutuamente. Actualmente se está evaluando el diseño con laproteína de matriz M, con otras VSP y como tercera estrategia, el cambio del tallo TM de VSP.Los resultados obtenidos han provisto información sobre la interacción entre los componentes delas VLP y su ensamblado. Se espera avanzar con la obtención de VLP con una correctaconformación para comenzar los ensayos de inmunización.