DESARROLLO DE UN METODO MULTIRESIDUO PARA LA CUANTIFICACION DE ANTIHELMINTICOS BENZIMIDAZOLES EN HUEVO DE GALLINA

BISTOLETTI, M; MORENO, L; CEBALLOS, L; ALVAREZ, L; LANUSSE, C

Buenos Aires. Argentina.

Jornada; XVIII Jornadas Argentinas y XIII Latinoamericanas de Farmaco-Toxicología Veterinaria; 2008

Albendazol (ABZ), fenbendazole (FBZ) y flubendazole (FLBZ) pertenecen al grupo de los benzimidazoles (BZD), fármacos antiparasitarios de gran uso en medicina veterinaria. Estos tienen amplio espectro de actividad antihelmíntica el cual incluye formas larvarias y adultas de nematodos y tenias en aves. Si bien hay muchos métodos publicados para la cuantificación de dichas moléculas en diversos tejidos/fluidos de diferentes especies animales (1,2,3), no existen publicados métodos multiresiduos para la detección de estas moléculas en aves. El objetivo del presente trabajo fue desarrollar y validar un método cromatográfico (HPLC) multiresiduo para la cuantificación de drogas BZD en plasma y huevo de gallina. Las drogas incluidas (10) fueron las siguientes: ABZ y sus metabolitos (albendazole sulfoxido (ABZ-SO), albendazole sulfona (ABZSO2) y albendazole aminosulfona (ABZ-NH2-SO2)); FBZ y sus metabolitos (fenbendazole sulfoxido  (OFZ) y febendazole sulfona (FBZ-SO2)); y FLBZ y sus metabolitos (flubendazole hidrolizado (FLBZ-H) y flubendazole reducido (FLBZ-R)). La separación de las moléculas se llevó a cabo por HPLC con una fase estacionaria C18 Kromasil 100-5 (250x46 mm) con elución de gradiente empleando una fase móvil compuesta por acetato de amonio y acetonitrilo a un flujo de 1.2 ml  La detección se realizó con detector UV a una longitud de onda de 292 nm. Hasta el momento se ha llevado a cabo la validación de dicho método en huevo. Los tiempos de retención de las moléculas fueron: ABZ-NH2-SO2:5,1 min.; ABZ-SO:6,1 min.; ABZ-SO2:11,5 min.; OFZ:11,6 min.; FLBZ-H:12 min.; FLBZ-R:12,8 min.; FBZSO2:13,4 min.; FLBZ:15 min.; ABZ:16,6 min.; FBZ:19 min. La cuantificación de las moléculas se llevó a cabo relacionando concentración de muestras blanco fortificadas con las diez moléculas en un determinado rango con la relación de área de los picos obtenidos para cada una de las moléculas y la del estándar interno oxibendazole (OXB). El proceso de validación se llevo a cabo siguiendo normas internacionales, incluyendo la determinación de los siguientes parámetros: test de linealidad, precisión, (ensayos intra-día e inter-días), recuperación absoluta y relativa, límite de detección (LOD) y límite de cuantificación (LOQ) en dicha matriz. La ventaja de este método es poder determinar simultáneamente con un mismo método concentraciones de diez moléculas del grupo en un rango lineal de concentración de 0.1-2 µg/mL, con un proceso de extracción líquido- líquido sencillo y de bajo costo.