Estudio de la utilización de glifosato por bacterias aisladas de un suelo Argiudol vértico del Sur de Santa Fe.

CARNÉ. IGNACIO; VIASSOLO, RODRIGO; ZABALOY, MARÍA CELINA; GOMEZ, ELENA V

Rosario

Congreso; XIV Congreso y XXXII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2012

Sociedad de Biología de Rosario

El control de malezas en cultivos genéticamente modificados resistentes al glifosato (Gf) y el barbecho químico previo a la siembra de trigo son los principales promotores del uso creciente de este herbicida, lo que supone un potencial riesgo de contaminación para el medio ambiente. El Gf es un compuesto organofosforado con un enlace C-P químicamente estable que inhibe la enzima 5-enolpiruvil shikimato 3-fosfato sintasa (EPSPS) la cual es indispensable para la síntesis, entre otros, de aminoácidos aromáticos en muchos organismos. Algunos microorganismos del suelo participan en la atenuación del impacto de xenobióticos mediante la degradación del mismo por mineralización o co-metabolismo. Así, se planteó como objetivo de trabajo el aislamiento de microorganismos degradadores de Gf puro en muestras de suelo provenientes de Colonia Napostá (Bs. As.) y de Zavalla (Santa Fe), con diferentes historias de exposición al herbicida. Los suelos fueron nombrados como BB0 y BBgli, para indicar la procedencia de Colonia Napostá sin historia de aplicación de glifosato y con historia, respectivamente. Lo mismo se hizo para los suelos de Zavalla, siendo Zav0 y Zavgli el suelo sin y con historia de aplicación de glifosato respectivamente. Para llevar a cabo el objetivo se realizó un cultivo de enriquecimiento en medio de aislamiento (MA) líquido compuesto por sales minerales y suplementado con extracto de levadura y un volumen adecuado de solución de Gf puro (97%; esterilizada por filtración y ajustado a pH=7) para obtener una concentración de final 1mM. Una muestra de 5 g de cada suelo se suspendió en erlenmeyers de 250 mL conteniendo 50 mL de MA. La incubación se realizó a 30º C por un lapso de 7 días al cabo del cual se repitió el tratamiento transfiriendo alícuotas de 1 mL a 50 mL del mismo medio e incubando de igual forma. Finalmente se sembraron 0,1 mL de éstos cultivos en MA + agar 1,8 % y se incubaron a 30 ºC por 7-10 días obteniéndose 9 aislamientos. Estos aislamientos fueron sembrados en medio triptona soja agar (TSA) en pico de flauta y conservados a 4 °C, o sembrados en caldo triptona soja (TSB) y crio-preservados en glicerol 20 % a -70 ºC. Hasta el momento se ha estudiado la capacidad de dos de los aislamientos, Zav0 A y Zavgli D para utilizar Gf puro a una concentración de 1 mM como fuente de carbono (C), fósforo (P) y como fuente de C y P, y sobre éstos resultados se ha evaluado la tolerancia a concentraciones mayores (1.5; 3.0 y 10 mM). Las curvas de crecimiento fueron realizadas por mediciones de densidad óptica a 660 nm, en medio MA sin extracto de levadura y con el agregado de glucosa (1 g/L) cuando se estudió al Gf como fuente de P. Los resultados mostraron que el Gf sería co-metabolizado y utilizado como fuente de P cuando hay en el medio una fuente de C y energía como glucosa (1 g/L). A 10 mM se observó una diferencia significativa en el crecimiento del aislamiento Zav0 A, indicando una relativamente alta tolerancia al principio activo (Figura 5). Para el aislamiento Zavgli D el desarrollo se produce a baja velocidad bajo las condiciones ensayadas. Mediante amplificación y secuenciación casi completa (1443 pb) del gen del ARNr de 16S y posterior alineamiento de la secuencia en Genbank (blastn), se obtuvo un 99% de identidad de Zav0 A con Rhodococcus wratislaviensis cepa NCIBM 13082 (Nº de Accesión NR_026524.1); bacteria Gram positiva, filamentosa, perteneciente al orden Actinomycetales, familia Nocardiaceae.