Novel aplicación del vector polietilenimina (PEI) en la preservación hipotérmica de hepatocitos.

MEDIAVILLA, M., KRAPP, A., CARRILLO, N., RODRÍGUEZ, J. Y GUIBERT, E.

Mar del Plata

Congreso; XLV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2000

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Se propone aplicar el vector NO-viral ADN/PEI en la transfección de células en frío, en condiciones de preservación para trasplante hepatocelular, en solución de la Universidad de Wisconsin (UW). Se marcaron hepatocitos aislados de ratas Wistar macho adultas con éster diacetato de 5(6)-carboxi succinimidil fluoresceína (20 uM en MEM, 37ºC, 15 min.) y se incubaron 48 hs. con un complejo plásmido/PEI (1ug ADN/106 cél.) en suspensión en UW (3.106 cél./ml) a 0ºC y en anoxia. El plásmido codifica para el gen de Ferredoxina NADP+ oxidorreductasa de arveja (FNRa) bajo control del promotor del citomegalovirus. Luego, las células fueron inyectadas en bazo (1,5-4.107 cél., 200ul) de ratas singeneicas, sacrificadas 24, 48, 72 hs. y 21 días postrasplante tomándose biopsias de bazo e hígado. Sobre los cortes histológicos se inmunodetectó FNRa. Mediante examen en microscopio de fluorescencia y óptico se observó colocalización de hepatocitos fluorescentes (trasplantados) y positivos para tinción inmunológica para los tiempos postrasplante 24, 48 y 72 hs., pero no a los 21 días ni en controles negativos realizados. Además los animales no mostraron signos de intolerancia hasta su sacrificio (máximo 21 días). Se concluye entonces que los hepatocitos trasplantados fueron efectivamente transfectados durante la preservación hipotérmica y que el sistema ADN/PEI no sería hepato-tóxico.