Estudio de la expresión de Aquaporina 8 (AQP8) y su elación con el contenido de agua en suspensiones de hepatocitos de rata (H) sometidos a preservación y posterior reoxigenación

MISZCZUK G., MEDIAVILLA M., PIZARRO M., RODRÍGUEZ J., BELLAROSA C., TIRIBELLI C. Y MAMPRIN,M.

Mar del Plata - Pcia. Buenos Aires - Argentina

Congreso; LV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La solución BGS (Bes-Gluconato-Sucrosa, Osm= 366±16) desarrollada por nuestro grupo de trabajo permite mantener via­bles y funcionales H, para ser utilizados en hígado bioartificial o trasplante celular. El objetivo de este trabajo fue analizar los efectos que el almacenamiento a 0°C en solución BGS y UW (Osm= 375±11) puede causar en el contenido de agua de H y su posible relación con el transportador de agua AQP8. Los H se preservaron por 72h a 0°C, en UW y BGS. Luego se reoxigenaron a 37°C, 95%C02 /5%02, en sol Krebs Henseleit 120 min. En ambos casos se analizó la Lib de LDH(%), el contenido de agua, los niveles del mRNA (RT-PCR) y la localización (inmunocitoquímica de fluorescencia) de AQP8. El contenido de agua (como estima­ción del volumen celular) se determinó secando las muestras a 90 °C, la evolución del mismo fue expresada como V/Vc, siendo V el contenido de agua en las diferentes condiciones experimentales y Vc el contenido de agua de los H controles (recién aislados) a 37°C. Luego de 72h no se observaron cambios significativos en la lib de LDH (UW 2,46±0,06 vs BGS 2,28±0,2, n=5), en los niveles de mRNA para AQP8 ni en su distribución que perma­nece intracelular. En cambio se encontró una disminución en el contenido de agua (UW: 0,62±0,25; BGS: 0,76±0,26 vs control: 1,00, n=7) p<0,05. Durante la reoxigenación los H mostraron contenidos de agua similares a los controles (Control: 0,92±0,13; UW: 1,21±0,28, BGS: 1,06±0,22, n=7). Los niveles de mRNA para AQP8 no arrojaron cambios significativos ni tampoco se observó exposición de AQP8 en membrana citoplasmática. Concluimos que durante la preservación de H tanto en UW como en BGS se produce una disminución en el contenido de agua total que no se correlaciona con cambios en la expresión o localización subcelular de AQP8; por lo que dicho fenómeno podría deberse a alta osmolaridad de la solución de preservación. Durante la reoxigenación los H recuperan el contenido de agua con valores similares a los controles.