Evaluación de la protección ejercida por ferredoxina reductasa de Pisum sativum ante la injuria provocada por hipotermia y umento de hierro intracelular quelable en células renales Cos-7

PUCCI MOLINERIS M., MAMPRIN M.E. Y MEDIAVILLA M.G.

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La injuria por hipotermia es mediada por un aumento de hierro (Fe) intracelular quelable, al menos en parte. Previamente hemos mostrado que la enzima Ferredoxina Reductasa (FNR) de arveja es capaz de prevenir el daño ocasionado por insultos oxidativos en hepatocitos y células Cos-7 (isquemia/reperfusión y H2O2, respectivamente). Se ha visto, en bacterias y plantas, que FNR protege del daño oxidativo mediado por OH?- producido por aumento del Fe intracelular. Nos propusimos estudiar si FNR es capaz de proteger a Cos-7 del daño producido por Fe y frío. Para ello, Cos-7 que expresan FNR y sus controles (transfectadas con el plásmido vacío) fueron sometidas a incubaciones (4 y 24h) en hipotermia (4°C, solución de preservación tipo Viaspan®, 5% CO2) o con Fe (37°C, Fe:hidroxiquinolina 5 uM:10 uM, DMEM/SFB, 5% CO2). Se estudiaron viabilidad (reducción de MTT; liberación de LDH) y producción de radicales O2?-. Los resultados fueron: 2O2, respectivamente). Se ha visto, en bacterias y plantas, que FNR protege del daño oxidativo mediado por OH?- producido por aumento del Fe intracelular. Nos propusimos estudiar si FNR es capaz de proteger a Cos-7 del daño producido por Fe y frío. Para ello, Cos-7 que expresan FNR y sus controles (transfectadas con el plásmido vacío) fueron sometidas a incubaciones (4 y 24h) en hipotermia (4°C, solución de preservación tipo Viaspan®, 5% CO2) o con Fe (37°C, Fe:hidroxiquinolina 5 uM:10 uM, DMEM/SFB, 5% CO2). Se estudiaron viabilidad (reducción de MTT; liberación de LDH) y producción de radicales O2?-. Los resultados fueron: Tratamiento             Ensayo                Viab. controles (%)            Viab. Cos-7/FNR (%) Sol. pres 24h           MTT                      71,28 ± 12,14                      72,49 ± 4,24 Fe 4h                      MTT                        69,33 ± 9,2                         71,74 ± 2,2 Fe 24h                    LDH                        57,47 ± 5,5                         54,88 ± 7,0 Fe 4h                      MTT                        69,33 ± 9,2                         71,74 ± 2,2 Fe 24h                    LDH                        57,47 ± 5,5                         54,88 ± 7,0 Sol. pres 24h           MTT                      71,28 ± 12,14                      72,49 ± 4,24 Fe 4h                      MTT                        69,33 ± 9,2                         71,74 ± 2,2 Fe 24h                    LDH                        57,47 ± 5,5                         54,88 ± 7,0 A 4h de incubación en frío no se observó reducción significativa de viabilidad (MTT: cont 108,2 ± 20,3 % y Cos-/FNR 108,21 ± 15,8 %; n=3). No se observó aumento de O2?- en ninguna condición. En conclusión, FNR no protege del daño por hipotermia o aumento del Fe intracelular. Es probable que el mecanismo de protección de FNR en Cos-7 observado anteriormente para H2O2 no involucre cambios en la homeostasis del Fe como sucede en bacterias y plantas.