Expresión de receptores alfa2-adrenérgico en diferentes líneas de cáncer de mama humana por inmunohistoquímica

PÉREZ C; BRUZZONE A; LUTHY IA

Mar del Plata

Congreso; I Congreso Conjunto de Sociedades Biomédicas; 2004

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Habíamos descripto anteriormente la expresión de recepto­res alfa2- adrenérgicos en líneas tumorales mamarias humanas por RT-PCR e indirectamente por unión de un radioligando es­pecífico. Sin embargo, no habíamos evaluado su presencia por inmunocitoquímica. Con el objetivo de determinar los subtipos de receptores alfa2-adrenérgicos presentes en diferentes líneas tumorales mamarias humanas y su localización, se realizaron ensayos de inmunocitoquímica y de inmunofluorescencia. Para ello se sembraron células IBH-6 e IBH-7 (anteriormente desarro­lladas en el laboratorio), además de MCF-7, en multicámaras comerciales de 8 celdas y se incubaron en medio de cultivo 10% SFB hasta semiconfluencia y posteriormente dos días en medio de cultivo con 2% SFB adsorbido. Las células fueron permeabi­Iizadas y se utilizaron anticuerpos policlonales de Santa Cruz Biotechnology específicos para los subtipos 2B y 2C. Se utili­zó luego el kit de Dako que incluye un anticuerpo biotinilado, estreptavidina peroxidasa y diaminabenzidina. Se contaron en­tre 300 y 1300 células para calcular el HScore. La inmunoci­toquímica indicó que todas estas líneas tumorales mamarias humanas presentaron una fuerte marcación con los anticuerpos para los subtipos 2B y 2C. El subtipo 2B mostró fundamentalmente marcación en la membrana plasmática, aunque también citoplasmático, mientras que el subtipo 2C mostró una locali­zación difusa en el citoplasma, y particularmente perinuclear. Por ejemplo, en las células MCF-7 se obtuvo un HScore de 375 para el 2C y de 351 para el 2B comparado con 121 en el control negativo. La inmunofluorescencia en microscopio confocal para la línea IBH-6, confirmó tanto la expresión como la localización por este método. Concluimos que los receptores 2B y 2C se expresan en las líneas de cáncer de mama estudiadas, y que la localización coincide con la descripta en otros tejidos, en mem­brana y citoplasma para el subtipo alfa B y distribuida en toda la célula, pero especialmente perinuclear para el alfa 2C.