La activación beta-adrenérgica induce cambios en el citoesqueleto de células no tumorales de mama humana MCF-10A

GARGIULO L; RIVERO E; ROMAROWSKY A; BUFFONE M; LUTHY IA; BRUZZONE A

Mar del Plata

Congreso; LVIII Reunión científica anual SAIC; 2013

Sociedad Argentina de Investigación Clinica

En trabajos anteriores demostramos que la activación B-adrenérgica con isoproterenol (Iso) induce la adhesión celular en la línea MCF-10A. La familia de proteínas Rho, entre ellas Rac, se encuentra involucrada en la reorganización del citoesqueleto. El objetivo fue evaluar los cambios producidos por el Iso en el citoesqueleto y estudiar posibles vías de señalización involucradas.Para determinar el sustrato al cual el Iso induce adhesión, las células se sembraron en vidrios recubiertos con laminina, colágeno o fibronectina en presencia o ausencia de Iso 0.1 μM. Todos los tratamientos indujeron un aumento en la adhesión celular (p<0.05) comparado a los vidrios sin tratamiento. Sin embargo, el Iso indujo adhesión específica a la fibronectina (p<0.05). Esto se ve acompañado de un aumento significativo del área de la célula adherida (Iso: 974,1±56,7 μm2 vs control: 333,2±22,78 μm2, p<0.01).Estudios de inmunofluorescencia demostraron que el Iso induce un cambio en la morfología celular como consecuencia de alteraciones en el citoesqueleto. Marcación para B-tubulina demuestra una marcación difusa dentro del citoplasma. Luego del tratamiento con Iso, se observan microtúbulos individuales extendiéndose radialmente desde el área perinuclear. Además, el tratamiento con Iso disminuye las microvellosidades observadas en las células no tratadas. Por western blot se observó que el cambio en el citoesqueleto de actina que provoca el Iso, se correlaciona con un aumento en la cantidad de actina fibrilar con respecto a la globular. El Iso indujo un aumento de la fosforilación de Akt y de la fosforilacion de la Ser-71 de Rac (sitio de fosforilación especifico de Akt), y un aumento de la forma fosforilada de cofilin.La activación B-adrenérgica, a través de estos cambios en el citoesqueleto podría estar regulando los procesos de adhesión, como así también los efectos ya conocidos sobre proliferación y migración en células de mama humana.