La activación de receptores alfa2-adrenergicos en células tumorales de mama humana provoca un aumento de la fosforilación de ERK1/2 dependiente de c-src.

BRUZZONE A; GARGIULO L; PEREZ PIÑERO C; CATILLO LF; S¡§¦NARD JM; PARIS H; LUTHY IA

Mar del Palata

Congreso; LVI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Hemos descripto la presencia de receptores alfa2-adrenérgicos (alfa2-RA) en líneas tumorales de mama humana. Su estimulación se asocia a un aumento de la proliferación celular y del crecimiento tumoral. Se desconocen los mecanismos moleculares implicados en esta respuesta. El objetivo fue estudiar el efecto de los compuestos alfa2-RA sobre la fosforilación de Erk1/2 (p-Erk) y Akt en estas líneas. La fosforilación de Erk y Akt se midió por Western Blot. Las células se transfectaron con lipofectamina 2000 y la activación de la luciferasa se midió con un luminómetro. En la línea MCF-7 la Adrenalina (Ad), y los agonistas alfa2-RA: dexmedetomidina (Dex) y UK-14304 (UK) (concentración 2uM) causaron un aumento de p-Erk. El aumento fue dosis-dependiente a partir de 1 pM para UK (p<0,05) y 0,1 nM para Dex (p<0,01) y a partir de los 10 min para Dex y 20 min para UK. El efecto de Ad se pudo revertir con antagonistas alfa2-específicos. En las líneas HS-578T y MDA-MB-231 el UK provocó un aumento de p-Erk. Se transfectaron las células MCF-7 con el plásmido pFA2-Elk1 unido a pFR-Luc. Erk regula la actividad transcripcional de Elk1. El UK y la Dex (2 uM) aumentan la actividad de la luciferasa con respecto al control. El inhibidor de c-src (PP2) bloqueó el efecto de la Dex. Esto se confirmó cotransfectando con diferentes formas de c-src (wild type, constitutivamente activa y la inactiva) y con el plásmido Erk2-GFP. La expresión de la forma activa provoca un aumento de p-ErkGFP con respecto a la fosforilación provocada por la expresión de c-src wild type, mientras que la forma inactiva inhibe por completo la p-ErkGFP. La Dex provoca un aumento de p-ErkGFP cuando se expresa la forma wild type de c-src, pero no cuando se sobreexpresa la forma activa o la inactiva. Se evaluó la activación de la vía de Akt involucrada en la sobrevida celular. La Dex aumenta la p-Akt a partir de los 120 minutos. En conclusión en la línea MCF-7 la estimulación de los alfa2-RA induce un aumento de p-Erk dependiente de c-src.