Variabilidad en regiones flanqueantes a genes de verotoxinas

KRÜGER, ALEJANDRA; GRANOBLES VELANDIA, CLAUDIA V.; LUCCHESI, PAULA M. A.

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología; 2013

Asociación Argentina de Microbiología

Introducción: Escherichia coli verotoxigénico es un patógeno zoonótico emergente, que causa diarrea y enfermedades severas en seres humanos, como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico, el cual en nuestro país alcanza la mayor incidencia a nivel mundial. Las verotoxinas son el principal factor de virulencia de esta bacteria y presentan distintos subtipos. Se encuentran codificadas en fagos temperados (profagos) insertos en el cromosoma de VTEC. Estos fagos juegan un rol fundamental en la patogénesis de VTEC. Los genes vt están dentro de la región tardía de estos fagos y, en consecuencia, la síntesis de verotoxina se encuentra regulada por los genes que se inducen durante el ciclo lítico de los mismos. Se ha postulado que la secuencia del gen q del fago podría jugar un rol en esta regulación. Objetivo: detectar, en cepas VTEC, secuencias características de fagos codificantes de verotoxinas en la región upstream del operón vt. Materiales y Métodos: Se analizó un total de 16 aislamientos: 2 del genotipo vt1EDL, 2 de vt2EDL, 4 de vt2EDL-vt2vha y 4 de vt2g. Como control positivo se utilizó la cepa de referencia E. coli EDL933, portadora de los subtipos vt1EDL y vt2EDL. El análisis se realizó por PCR combinando primers específicos de vt1 o vt2 con primers complementarios a secuencias de los fagos H-19B y 933W (Unkmeir y Schmidt, 2000). Se combinó el primer forward Q-stx-f (complementario al gen q) con un primer reverse específico de vt1 o vt2 según el genotipo de cada cepa. En los aislamientos vt2 -positivos además se combinó un primer forward complementario al gen ninG con el primer específico de vt2. Para evaluar compatibilidad del primer específico de vt2 en las cepas que no produjeron amplificación, se realizó una PCR combinándolo con el primer forward 177U. Resultados: en todos los aislamientos de los genotipos vt1EDL, vt2EDL y vt2EDL-vt2vha se obtuvo un amplímero del tamaño esperado al realizar la PCR combinando el primer específico del gen q y el complementario a vt1 o vt2. Sin embargo, no se obtuvo amplificación para los aislamientos portadores de vt2g, ni cuando se utilizó el primer específico del gen ninG. La ausencia de amplificación en estos casos no se debió a falta de complementariedad entre el primer específico de vt2 y la secuencia de vt2g, ya que se obtuvo el amplímero esperado cuando se combinó este primer con el 177U. Conclusiones: se comprobó la presencia del gen q del fago en la región upstream del operón vt en los aislamientos portadores de los genotipos vt1EDL, vt2EDL y vt2EDL-vt2vha, y también la del gen ninG en los de estos 2 últimos genotipos. Sin embargo, no pudo ser demostrada la presencia de estos genes del fago en la región flanqueante.