Estudio de la diversidad genética de cepas de E. coli verocitotoxigénico aisladas a partir de humanos, bovinos y alimentos derivados en Argentina

PARMA, ALBERTO E.; LUCCHESI, PAULA M. A.; KRÜGER, ALEJANDRA; SANSO, A. MARIEL; BUSTAMANTE, ANA V; GRANOBLES, CLAUDIA V.

Tandil, Buenos Aires

Jornada; 3ras JORNADAS ACADÉMICAS DEL DEPARTAMENTO DE SANIDAD ANIMAL Y MEDICINA PREVENTIVA; 2008

Departamento SAMP-FCV-UNCPBA

Durante el proyecto se consiguió la puesta a punto en nuestro laboratorio de numerosas técnicas para la identificación de polimorfismos de genes de virulencia de VTEC. Las variantes de verotoxina asociadas al desarrollo de síndrome urémico hemolítico (SUH) en el hombre fueron las que predominaron en los aislamientos de bovinos y alimentos derivados. Los genes vt asociados a menor patogenicidad se presentaron siempre en cepas que además portaban una o más de las variantes relacionadas a enfermedad severa. Se encontró por primera vez en Argentina la variante vt2g, que aún está poco estudiada a nivel mundial. Se detectaron títulos altos de citotoxicidad en células Vero en numerosos aislamientos, aparentemente asociados a la presencia de determinadas variantes vt, más que al serotipo. Se pusieron a punto metodologías de PCR para la detección de genes localizados en los megaplásmidos y se comenzó a aplicarlas en la caracterización de aislamientos agrupados por serotipos, confirmando la gran variabilidad de estos plásmidos. Se encontraron 2 variantes del gen saa que aún no habían sido halladas a nivel mundial.     Mediante la caracterización por perfiles de RAPD de VTEC aislados de bovinos y alimentos derivados, se encontraron diferencias entre aislamientos pertenecientes a un mismo serotipo y que no habían podido distinguirse considerando la presencia de varios factores de virulencia. Además, se adecuó un ensayo de MLVA (“Multiple Locus VNTR Analysis”), implementándolo para la subtipificación de aislamientos del serotipo O157:H7. A través de esta amplificación de secuencias repetidas en tándem se encontró una gran diversidad genética dentro del serotipo, diferenciando incluso aislamientos provenientes de bovinos del mismo establecimiento. Se ha logrado cumplir con gran parte de los objetivos, restando finalizar la caracterización de los megaplásmidos, completar la caracterización en cuanto a factores de virulencia de las cepas de origen humano, realizar los estudios de subtipificación mediante PFGE y MLVA en cepas no-O157, así como estudiar factores que expliquen las diferencias de citotoxicidad in vitro que hallamos entre distintos aislamientos.