Identificación de vt2g utilizando metodos convencionales de subtipificación de vt2 en Escherichia coli verotoxigenico

KRÜGER, ALEJANDRA; LUCCHESI, PAULA M. A.; PARMA, ALBERTO E.

Mendoza

Jornada; XII Jornadas Argentinas de Microbiología, I Jornadas Conjuntas de Microbiología, Infectología y Alergia e Inmunología de Cuyo, III Jornadas Mendocinas de Zoonosis.; 2006

Asociación Argentina de Microbiología, Sociedad de Infectología de Mendoza; Sociedad de Alergia, Asma e Inmunología de Mendoza

Escherichia coli verocitotoxigénico (VTEC) puede causar severas enfermedades en humanos como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. El factor de virulencia más importante de VTEC es la producción de uno o más tipos de verocitotoxinas (VT1, VT2, y variantes). Recientemente se ha descubierto una nueva variante, VT2g, en VTEC aislado de bovino, cuya secuencia tiene alta similitud con la de las variantes asociadas con enfermedades en humanos. El objetivo de este trabajo es evaluar la aplicación de los métodos más comunes de subtipificación de vt2 en la identificación de vt2g. Se aplicaron los métodos de Tyler, Piérard y Bastian a la cepa 7v, portadora de la nueva variante vt2g. Estos métodos consisten en una amplificación de un fragmento de vt2 por PCR y la posterior digestión con enzimas de restricción. En este análisis, vt2g se comporta similarmente a vt2-EDL, pero en todos los casos logra identificarse, como se detalla a continuación en los distintos métodos: - Tyler: presenta igual perfil que vt2-EDL cuando se digiere con HaeIII y NciI, pero se diferencia en que vt2g no se digiere con RsaI. - Piérard: tanto vt2g como vt2-EDL no se digieren con HaeIII pero además vt2g no se digiere con PvuII. - Bastian: vt2g posee un sitio de restricción para HincII menos que vt2-EDL, dando así un fragmento menos, además de otro de mayor tamaño que vt2-EDL. Estos resultados demuestran que se puede detectar la presencia de vt2g sin requerir la incorporación de una nueva reacción de PCR, sino por medio de métodos empleados habitualmente. La búsqueda de esta nueva variante tanto en cepas aisladas de bovinos como de casos humanos es importante debido a su probable significancia clínica.