Evaluación de citotoxicidad de cepas Escherichia coli verotoxigénico portadoras del gen vt2g.

KRÜGER, ALEJANDRA; LUCCHESI, PAULA M. A.; ARROYO, GUILLERMO H.; PARMA, ALBERTO E.

Buenos Aires

Congreso; XI Congreso Argenino de Microbiología; 2007

Asociación Argentina de Microbiología

E. coli verotoxigénico (VTEC) puede causar severas enfermedades en humanos como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. El bovino es considerado su principal reservorio. El factor más importante de virulencia de este patógeno es la producción de verotoxinas (VT1, VT2). VT2g, una de las variantes del grupo VT2, fue descripta por primera vez en una cepa VTEC aislada de materia fecal de bovino. Los escasos estudios que se han realizado hasta el momento determinaron que vt2g se encuentra en baja prevalencia en ganado bovino y sugieren que podría ser una variante emergente. El análisis de la cepa de referencia para vt2g mostró alta similitud genética con secuencias vt asociadas a enfermedades en humanos y citotoxicidad a células Vero comparable a cepas con variante VT2-EDL933. Ambas características indicarían probable significancia clínica. El objetivo de este trabajo fue evaluar la actividad citotóxica en células Vero de cepas VTEC autóctonas portadoras del gen vt2g. Para este fin se estudiaron 4 cepas vt2g-positivas en paralelo con cepas vt2-EDL933, con y sin inducción con mitomicina C. Una colonia de cada muestra se cultivó en Caldo Microbiológico (Nº 3, Merck) a 37ºC con agitación por un período de 5 h. Luego se subdividió el cultivo en 2 fracciones, agregándole a una de ellas mitomicina C  y se continuó la incubación durante toda la noche. Posteriormente se centrifugaron a 12000 rpm durante 10’ a 4ºC y se guardaron los sobrenadantes a –20ºC. Se realizaron diluciones seriadas ½ de los sobrenadantes en medio MEM en placa de 96 pocillos. Luego se agregó a cada pocillo una suspensión de aproximadamente 4 x 104 células Vero. Las placas fueron incubadas a 37ºC en una atmósfera con 5% de CO2 durante 48 h. Las células se tiñeron con una solución de Cristal Violeta. El título de verotoxina se expresó como la recíproca de la mayor dilución que causó 50% de efecto citopático después de 48 h. determinado por observación microscópica. Tres de las 4 cepas vt2g-positivas presentaron menor actividad citotóxica en  relación a cepas vt2-EDL933-positivas, mientras que la cuarta tuvo actividad comparable Además, aunque las 4 aumentaron su título al ser previamente inducidas con mitomicina, los mismos fueron sensiblemente menores. Desde el punto de vista citopatogénico, los sobrenadantes de cultivos de VTEC vt2g-positivos aislados de bovinos en Argentina mostraron tener menor citotoxicidad que los de cepas VTEC portadoras de la variante VT2-EDL933. Son necesarios estudios que determinen la prevalencia del gen vt2g en cepas aisladas no sólo de bovinos, sino también de humanos, para determinar la patogenicidad e importancia clínica de cepas portadoras del gen vt2g.