Factores que influyen en el grado de citotoxicidad de cepas de Escherichia coli verotoxigénico (VTEC)

GRANOBLES VELANDIA, CLAUDIA V.; KRÜGER, ALEJANDRA; LUCCHESI, PAULA M. A.

Tandil

Jornada; PRIMERAS JORNADAS DE DIFUSIÓN DE PROYECTOS DOCTORALES. Doctorado en Ciencias Animal. Facultad de Cs. Veterinarias-UNCPBA; 2010

Comisión graduados del Doctorado en Ciencia Animal. Fac. Cs. Veterinarias. UNCPBA

Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) es un patógeno causante de diarrea y severas enfermedades en seres humanos, como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. El ganado bovino es el principal reservorio de cepas VTEC, y en consecuencia los alimentos derivados de los mismos constituyen un importante vehículo de infección. La principal estrategia de virulencia de estas bacterias es la producción de verotoxinas (VTs), clasificadas en 2 tipos (VT1 y VT2). Se encuentran codificadas en fagos temperados, los cuales juegan un rol importante tanto para la síntesis como la liberación de estas toxinas. El objetivo de este estudio es determinar factores que influyen sobre el grado de citotoxicidad de cepas VTEC. Para ello se seleccionaron cepas con diferencias en citotoxicidad y se evaluó la inducción del ciclo lítico de bacteriófagos, mediante el monitoreo de la lisis de cultivos en medio líquido a través de la medición de la densidad óptica (DO), con y sin inducción con mitomicina C. Por otro lado se realizó la cuantificación de las unidades formadoras de placa (ufp) a través del método de doble capa de agar. Las placas de lisis correspondientes a bacteriófagos codificantes de verotoxina se detectaron a través de la hibridación con sondas específicas de vt1 y vt2 marcadas con digoxigenina. Actualmente se están determinando los niveles de expresión de la toxina a través de un ELISA y, posteriormente, se identificará la presencia de más de un profago codificante de VT en una misma cepa mediante la técnica de Southern-blot y se analizarán por PCR regiones flanqueantes de genes de verotoxina. En todos los cultivos se observó efecto de la mitomicina C, las curvas de crecimiento/lisis mostraron que la mayoría de los aislamientos en presencia de mitomicina C alcanzaron un máximo de crecimiento a las 2h post-inducción, con valores de DO±2 a partir del cual se observó la lisis. Los cultivos en ausencia de mitomicina C alcanzaron valores máximos de DO de ±4 que se mantuvieron durante el transcurso del experimento. No se observaron placas de lisis en cepas vt1 positivas ni se detectaron por hibridización. Entre las cepas vt2 positivas se observaron placas de lisis en un subgrupo de las mismas y correspondieron a fagos vt2. Según resultados preliminares, también se hallaron diferencias en los niveles de verotoxinas secretados. La relación entre los resultados que se obtengan a través de las distintas estrategias permitirá una mejor comprensión de la actividad citotóxica de cepas VTEC.