INVESTIGADORES
KRÜGER Alejandra
congresos y reuniones científicas
Título:
Identificación de Escherichia coli por PCR
Autor/es:
SCALI, LETICIA; GRANOBLES, CLAUDIA V.; KRÜGER, ALEJANDRA; LUCCHESI, PAULA M. A.
Lugar:
Tandil, Buenos Aires
Reunión:
Otro; ENCUENTRO BECARIOS UNESCO 2008; 2008
Institución organizadora:
UNESCO-UNCPBA
Resumen:
Escherichia coli verotoxigénico (VTEC) es un grupo de patógenos responsables de intoxicaciones alimentarias, capaz de causar graves enfermedades en niños como colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico. La producción de verotoxina (VT) es el principal factor de virulencia y la característica que define a este grupo de patógenos. Otros microorganismos también pueden producir esta toxina, por lo cual es importante la identificación genérica de E. coli además de la presencia de VT o de los genes que la codifican. El procedimiento microbiológico tradicional para evaluar E. coli genérico insume mucho tiempo y es laborioso.
El objetivo específico de este trabajo fue implementar una metodología rápida y sensible para identificar E. coli y diferenciarla así de otras bacterias.
Otro objetivo desarrollado en paralelo fue participar en la puesta a punto de la metodología, partiendo desde la búsqueda de los datos en la bibliografía de referencia hasta la realización de la PCR y la observación e interpretación de resultados.
Para cumplir nuestros objetivos realizamos una búsqueda bibliográfica de metodologías de identificación genérica de E. coli, seleccionando una reacción de PCR que amplifica el gen codificante de la proteína universal de estrés (uspA) específica de E. coli. Propusimos las condiciones iniciales de reacción que luego modificamos gradualmente en distintos ensayos.
En la optimización de la reacción de PCR en nuestro laboratorio encontramos que la temperatura de annealing adecuada fue llamativamente más baja que la publicada en la bibliografía. La reacción resultó específica de E. coli, ya que no se obtuvo amplímero cuando se evaluaron otras especies bacterianas.
La implementación de esta reacción de PCR específica de E. coli es de gran utilidad para los estudios realizados nuestro laboratorio, ya que complementa la identificación rápida y específica de VTEC.
