Diferenciación por la técnica de RAPD de cepas de Escherichia coli verocitotoxigénico

LUCCHESI, PAULA M. A.; KRÜGER, ALEJANDRA; PADOLA, NORA L.; SANZ, MARCELO E.; PARMA, ALBERTO E.

Villa Giardino, Córdoba

Congreso; I CONGRESO VETERINARIO SOBRE PRODUCCIÓN, SEGURIDAD Y CALIDAD ALIMENTARIA SOSTENIBLE Y I ENCUENTRO NACIONAL DE SALUD PÚBLICA VETERINARIA; 2003

El bovino es reservorio de Escherichia coli verocitotoxigénica, de allí la importancia del análisis de cepas aisladas a partir del mismo y de alimentos derivados. El objetivo de este trabajo fue estudiar la diversidad genética de dichas cepas mediante la técnica de amplificación al azar de ADN polimórfico (RAPD). Se estudiaron cepas de los serotipos O20:H19, O91:H21, O113:H21, O157:H7, O171:H2, O117:H7 y O174:H21 que habían sido aisladas de bovinos, de alimentos cárneos y de humanos (O157:H7). Las cepas se cultivaron en medio Luria Bertani a 37ºC durante 18 h con agitación. Se ajustó la densidad óptica a 600 nm de una alícuota del cultivo, las bacterias se sedimentaron por centrifugación, se resuspendieron y el ADN se liberó por ebullición. Para la reacción de RAPD se utilizó el primer M13, con un termociclado de 5 min a 94ºC seguido de 40 ciclos de 1  min a 94ºC, 1  min a 50ºC y 1  min a 72ºC. Cada perfil de RAPD se definió por la presencia o ausencia de bandas en determinadas posiciones del gel. Se encontraron 2 ó más perfiles de RAPD diferentes dentro de los serotipos O20:H19, O113:H21, O157:H7, O171:H2, O117:H7 y sólo 2 perfiles muy similares entre cepas del serotipo O174:H21. Con el primer utilizado no pudieron detectarse diferencias entre los perfiles de las cepas del serotipo O91:H21. Existe variabilidad genética entre aislamientos de un mismo serotipo y además se encuentran perfiles de RAPD compartidos por cepas obtenidas de bovinos y alimentos cárneos.