INACTIVACIÓN DE BACTERIOFAGOS MEDIANTE UV PARA LA POSTERIOR EVALUACIÓN DE ENZIMAS FÁGICAS

JUÁREZ ANA ELISA; KRÜGER ALEJANDRA; RODRÍGUEZ VICTORIA A.; DÁNGELO CRISTIAN A.; POMARICO JUAN A.; LUCCHESI PAULA M. A.

Buenos Aires

Jornada; II Jornadas Latinoamericanas de Bacteriófagos; 2022

La apremiante necesidad de desarrollarestrategias de control de bacterias alternativas al uso de antimicrobianos hadado relevancia al empleo de bacteriófagos y enzimas fágicas. Para evidenciarla presencia de estas enzimas y otros componentes antibacterianos útiles parabiocontrol, se requieren estrategias que permitan una evaluación de laactividad antibacteriana independiente de la replicación fágica. Se sabe que laluz ultravioleta (UV) daña los ácidos nucleicos impidiendo la replicación delADN y la transcripción del ARN, lo que finalmente causa la inactivación de losmicroorganismos y, aunque otros componentes pueden resultar dañados, tambiénpueden mantenerse actividades enzimáticas. En base a esto, el tratamiento conluz UV permitiría inferir la presencia de componentes con acciónantimicrobiana. Nos propusimos como objetivo evaluar las condiciones necesariaspara lograr la inactivación de bacteriófagos, aislados por nuestro grupo detrabajo, que presentan actividad lítica contra Escherichia coli productor de toxina Shiga. Dado que la luz UVtiene limitada capacidad de penetrar en un líquido, colocamos 500 μl de la suspensión del fago L7.3 (stock de altotítulo fágico,  ~1x1010UFP/ml)  de manera que forme una capa muydelgada sobre las placas de Petri de vidrio utilizadas. Realizamos un primerensayo en el que evaluamos 3 tratamientos con luz UV de una longitud de 254 nma una intensidad de 0,041 W/cm2 (T1: 5’ de exposición sin agitación;T2: 20” de exposición sin agitación; T3: 1’40” de exposición realizando 2agitaciones intermedias de forma manual) así como un control sin tratar (stockfágico colocado en placa de Petri sin exponer a luz UV). Se realizó un ensayoen doble capa de agar y un spot testpara cuantificar los fagos que conservaron su infectividad, colocandodiferentes diluciones de los fagos tratados y del control, empleando la cepa E. coli DH5α como hospedadora. Posteriormente, se realizó unnuevo ensayo con mayor tiempo de exposición a luz UV (5´ 20 ") yagitaciones manuales cada 20” (T4). Se observaron disminuciones de ufp de ~2log por efecto del tratamiento T1, 1 log por T2 y ≥ 9 log por T3 y T4. En estos2 últimos tratamientos, se observó efecto lítico sin presencia de placas delisis con las menores diluciones de la suspensión tratada, en el ensayo de spot test. Este estudio permitióidentificar tratamientos con luz UV eficaces para inactivar este fago ycontinuar detectando actividad lítica. Dadas las características de la luz UV,se destaca la importancia de la agitación durante el tratamiento.