Desarrollo de un test de alta sensibilidad para la detección de actividad estrogénica in vivo de perturbadores endocrinos

RAMOS JG, VARAYOUD J, MONJE L, BOSQUIAZZO VL, DURANDO M, LOWER M, SANTAMBROSIO N, BERNHARDT T, MUÑOZ-DE-TORO M, LUQUE EH

Mar del Plata

Congreso; LI Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

La necesidad de desarrollar ensayos biológicos in vivo para detectar actividad hormonal de sustancias químicas se ha incrementado en los últimos años debido a la alta exposición de los animales y el hombre a perturbadores endocrinos (PEs). El objetivo del presente trabajo es desarrollar un test molecular basado en PCR competitiva para la detección de actividad estrogénica in vivo de PEs. Dicho test se basa en la detección de cambios en la transcripción de genes estrógeno-sensibles en útero de ratas expuestas a sustancias hormonalmente activas. Ratas adultas ovariectomizadas fueron inyectadas (sc) durante 3 días con: aceite de maíz (vehículo); 17b estradiol (E2) (20 ug/kg), el polimerizante bisfenol A (BPA) (200 mg/kg) y el plaguicida endosulfán (ENDO) (6 mg/kg). Cuatro horas después de la última inyección se extrajo el útero y se determinó: 1- el peso húmedo (ensayo uterotrópico clásico para evaluar actividad estrogénica), 2- la expresión del gen estrógeno-sensible vascular endothelial growth factor (VEGF) mediante RT-PCR competitiva (test ultrasensible). Para obtener el fragmento de ADN competidor para PCR se realizaron amplificaciones a baja temperatura de hibridación con los mismos primers que se usan en la reacción definitiva, utilizando como molde ADN de fago lambda. El ensayo uterótropico dio positivo para los animales tratados con E2 y BPA (p<0.01), pero no para los tratados con ENDO. Utilizando el test ultrasensible detectamos que tanto E2, BPA como ENDO aumentaron significativamente la expresión del ARNm de VEGF, en relación al control tratado con vehículo (p<0.05). Estos resultados sugieren que la detección del ARNm de VEGF por PCR competitiva es una metodología útil y sensible para la evaluación de la actividad de compuestos hormonalmente activos. Se completará la validación de la metodología propuesta investigando dosis ambientalmente relevantes de PEs sobre la expresión de VEGF y otros genes estrógeno-sensibles tales como lactoferrina y C3.