EVALUACIÓN CUANTITATIVA DE ADN LIBRE EN PLASMA DE PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE CRÓNICA MEDIANTE PCR EN TIEMPO REAL

BOSQUIAZZO VL; NILVA G; PADUÁN BS; ROSSETTI MF; CUESTAS; RAMOS JG

Congreso; III Congreso Bioquímico del Litoral; 2015

En los últimos años se ha asociado la presencia de ADN circulante libre de células (cfDNA) a procesos oncológicos. Sin embargo, el cfDNA puede encontrarse tanto en personas sanas, con enfermedades no malignas, como así también en personas con diversos tumores malignos. En personas con cáncer se han encontrado mayores concentraciones de cfDNA que las concentraciones demostradas en los individuos sanos. La mayoría de los estudios de cfDNA se han realizado en pacientes con tumores sólidos, poco se conoce en relación a la concentración de cfDNA en pacientes con tumores hematológicos. En el presente estudio investigamos si la concentración de cfDNA se modifica en los pacientes con tumores hematológicos, específicamente con leucemia mieloide crónica (LMC). Para responder a ello nuestro objetivo fue en primer lugar determinar las mejores condiciones de almacenamiento del cfDNA, luego establecer valores de referencia para la concentración total de cfDNA en individuos sanos y por último cuantificar las concentraciones de cfDNA en pacientes con LMC. Además nos propusimos evaluar la viabilidad de utilizar este parámetro como un factor pronóstico de respuesta al tratamiento. Se utilizaron muestras de plasma de 20 individuos clínicamente sanos y de 10 pacientes con LMC al diagnóstico y al cabo de diferentes meses después de iniciado el tratamiento. Se aisló el ADN libre de cada muestra usando el kit QIAamp DNA Blood Mini (Qiagen) y su concentración total se evaluó mediante la determinación del gen de β-globina por PCR en tiempo real. A los pacientes con LMC también se les extrajo una muestra de sangre para la cuantificación de la expresión del gen de fusión BCR-ABL (marcador específico de respuesta molecular al tratamiento en pacientes con LMC) por PCR en tiempo real. En primera instancia se determinaron las condiciones óptimas de almacenamiento de cfDNA en el plasma y luego de su purificación. La cuantificación de β-globina no demostró diferencias significativas utilizando muestras de plasma obtenidas inmediatamente después de la extracción de sangre y luego de haberlas conservado durante un año a -20 °C. Sin embargo, la concentración de β-globina disminuyó cuando el cfDNA se almacenó durante 15 y/o 30 días tanto a -20°C como a -80°C. No se observaron diferencias significativas en la concentración de cfDNA cuando éste se conservó durante 5 días a -20°C. La concentración total de ADN de plasma de individuos sanos varió de 0.052 a 0.244 ng/ul. Los niveles plasmáticos de cfDNA en los pacientes con LMC, al momento del diagnóstico, fueron significativamente mayores a los valores de referencia. Luego de comenzar el tratamiento los valores de cfDNA disminuyeron hasta alcanzar valores normales. En este grupo de pacientes, la concentración de cfDNA y el número de leucocitos (marcador de respuesta hematológica al tratamiento en pacientes con LMC) mostró correlación significativa y positiva. Por otra parte, la cuantificación de cfDNA mostró el mismo patrón de cambio que la expresión del gen de fusión BCR-ABL. Estos resultados sugieren que la concentración de cfDNA podría ser un marcador sensible de éxito terapéutico en pacientes con LMC.