Implementación de técnicas de microfluídica para analizar migración celular colectiva

MIÑO, L. GASTÓN; SIGOT, VALERIA; SAMPEDRO, MARÍA F

Cordoba

Congreso; 105° RAFA Webinar; 2020

La migración celular colectiva es un fenómeno complejo en el que los esfuerzos mecánicos y las deformaciones producen una respuesta biológica. Durante este movimiento un grupo de células se desplaza de forma cohesiva y direccionada dentro de otro tejido. Esta coordinación es clave durante el desarrollo embrionario, la regeneración de epitelios como así también para la invasión de ciertos tumores. El primordio de la línea lateral posterior (pLLP) del pez cebra es un tejido modelo para analizar la migración celular colectiva y direccionada mediante microscopía de fluorescencia in vivo. Para interpretar la dinámica de la migración, el pLLP puede considerarse como un continuo que fluye entre la epidermis.Para cuantificar el comportamiento dinámico del primordio proponemos el análisis mediante PIV (Particle Image Velocimetry) sobre adquisiciones de imágenes 3D+t en embriones de 27-29 hpf (horas post fertilización) que expresan la molécula de adhesión cadherina epitelial-GFP (Green Fluorescent Protein) en las membranas celulares.Las células del pLLP se segmentaron en base a la fluorescencia de cadhE-GFP y la velocidad instantánea local a lo largo del primordio se calculó en intervalos de 10 minutos durante una hora de migración. Para ésto, mediante el plug-in PIV (Image J) se estimó por correlación cruzada el desplazamiento del patrón de fluorescencia entre dos cuadros sucesivos, producto del movimiento del primordio a través de la epidermis, generándose así campos de velocidades locales.El análisis de los campos vectoriales mostró que la componente axial de la velocidad (Vx) en distintas áreas del pLLP exhibió fluctuaciones espaciales y temporales con magnitudes que variaron entre -0.6 a 0.6 µm/min, mientras que la velocidad de desplazamiento global del primordio fue en promedio de 0.8 µm/min.Por otro lado, el análisis morfológico mostró que si bien el primordio se elonga durante la migración, el aumento en la relación de aspecto también ocurre en forma oscilatoria análogamente a las Vx.Estos resultados preliminares sugieren que las velocidades locales determinadas por PIV a lo largo del primordio poseen una dinámica diferente a la velocidad de desplazamiento global y podrían reflejar eventos de tracción de la epidermis y de elongación/contracción del pLLP durante la migración.