Expresión de la proteína insular asociada a la neogénesis (INGAP) en islotes de hamsters normales

FLORES L; GARCÍA ME; BORELLI MI; DEL ZOTTO H; TERRUZI P; ALZUGARAY ME; MAIZTEGUI B; GAGLIARDINO JJ

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Diabetes; 2002

Sociedad Argentina de Diabetes

Objetivos: Determinar la posible presencia y expresión del INGAP en células insulares y exocrinas de hamsters adultos normales. Métodos: Se extrajeron páncreas de hamsters dorados machos normales para realizar los siguientes estudios: a) Identificación inmunohistoquímicas de células INGAP positivas en cortes fijados de páncreas intacto, de islotes frescos y cultivados durante 72 h (aislados por digestión con colagenasa), y en extendidos de células pancreáticas exocrinas, utilizando en todos los casos anticuerpo específico para INGAP y el complejo estreptavidina-biotina (en cada caso se utilizaron 3 animales y para cada estudio se analizaron más de 3 niveles de sección). b) Técnica dot-blot usando el sobrenadante de homogenados de islotes y el anticuerpo para INGAP antes mencionado (n=3). c) Transcripción reversa y reacción en cadena de polimerización (RT-PCR) usando ARN total extraído de los islotes aislados y de tejido exocrino como molde, y un par específico de primers sense-antisense (n=5). d) Control de la secuencia de los productos obtenidos por PCR. Resultados: Se identificaron células INGAP-positivas en células insulares, exocrinas y ductales tanto en tejido intacto fijado como en tejido pancreático digerido. El INGAP también se identificó (dot blot) en el sobrenadante de homogenados de islotes aislados frescos y cultivados, y en células exocrinas. El ARNm de INGAP se identificó en muestras de ARN total tanto de islotes aislados como de tejido exocrino libre de islotes. Conclusión: Nuestros datos demuestran que el INGAP está presente y se expresa en células pancreáticas endocrinas y exocrinas de hamsters normales. La ubicuidad topográfica del INGAP sugiere su posible rol en el proceso fisiopatológico de crecimiento insular, y su efecto protector sobre la diabetes inducida por estreptozotocina.