Degradación de la proteína oncosupresora DLG mediada por la proteína E6 derivada de Papillomavirus Humanos de alto riesgo y su relación con la oncogénesis.

CAVATORTA, ANA LAURA; CHOUHY, DIEGO; NOCITO, ANA LIA; GARDIOL, DANIELA; GIRI, ADRIANA A.

Buenos Aires

Congreso; VIII Congreso Argentino de Virología; 2005

Sociedad Argentina de Virología

Los Papillomavirus humanos (HPV) que infectan mucosas genitales han sido clasificados como de alto y de bajo riesgo, según las manifestaciones clínicas que provocan sus infecciones. Los de alto riesgo, como HPV-16 y HPV-18, se encuentran asociados con el desarrollo de carcinomas de cuello de útero invasivos, y de las lesiones intraepiteliales precursoras. Las proteínas virales oncogénicas, E6 y E7, ejercen sus actividades transformantes interfiriendo con la función de proteínas celulares que regulan la proliferación y diferenciación celular. Las proteínas E6 estimulan la degradación proteolítica de sus blancos celulares, tales como p53, c-myc, bak, h-Dlg (DLG) y h-scrib, a través del mecanismo dependiente de ubiquitina. DLG (proteína humana homóloga al supresor de tumores de Drosophila disc large, Dlg-A), constituye el primer blanco de E6 involucrado en contactos célula-célula y en el control de la polaridad. E6 presenta una regulación diferencial por parte de proteína quinasa A (PKA). Cuando las proteínas E6 se encuentran fosforiladas en su región carboxilo terminal, se reduce la capacidad de interaccionar con DLG y de estimular su degradación. La fosforilación de E6 por PKA, representa una manera de regular diferencialmente la degradación de DLG. El objetivo general de este trabajo consiste en el estudio de los mecanismos moleculares que pueden contribuir al desarrollo de cáncer en relación a infecciones por HPV. En particular evaluamos la contribución de la degradación de DLG mediada por E6 en la progresión maligna en lesiones asociadas a HPV. Para ello analizamos los niveles de expresión y localización celular de DLG en biopsias cervicales por inmunohistoquímica. La presencia de HPV e identificación de tipos oncogénicos fue determinada con un sistema basado en PCR con revelado colorimétrico. Los resultados demostraron cambios en los patrones de distribución celular y tisular de DLG en las lesiones escamosas intraepiteliales (SIL) en comparación con los tejidos normales, mientras que en las muestras derivadas de carcinomas invasores el nivel de expresión de DLG disminuyó notablemente. Los resultados obtenidos sugieren que alteraciones en los patrones de expresion de DLG contribuirían a la evolución de lesiones intraepiteliales y que la pérdida de DLG sería un evento tardío e importante para la carcinogénesis cervical. Posteriormente, analizamos la actividad de PKA en muestras provenientes de lesiones genitales por inmunohistoquímica. Los resultados obtenidos permitieron demostrar que en SIL, PKA se encuentra activa dado que fue posible detectar sustratos fosforilados en el citoplasma y/o núcleo de las células que conforman los distintos estratos, mientras que en la mayoría de las muestras de carcinomas invasores la actividad de PKA estaba ausente o bien sus niveles eran bajos comparados con tejido normal. Los datos obtenidos indicarían que una fosforilación diferencial de E6 por PKA en las distintas lesiones, podría explicar las divergencias en los niveles de expresión de DLG observados en las biopsias, en relacion a la capacidad de E6 de estimular su degradacion.