CARACTERIZACION DE UNA NUEVA VARIANTE (L163R) DE LA PROTEINA von HIPPEL-LINDAU (pVHL)

C. MATHO; A. MERLINO; GABRIELA SANSO; E. L. COITIÑO; P. PENNISI

Montevideo

Congreso; XXIII REUNION DE LA SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE ENDOCRINOLOGIA PEDIATRICA; 2012

SOCIEDAD LATINOAMERICANA DE ENDOCRINOLOGIA PEDIATRICA

Antecedentes:La enfermedad de von Hippel-Lindau (VHL) es un sindrome hereditario causado por mutaciones del gen VHL. La proteina codificada por VHL (pVHL) integra un complejo multiproteico cuya funcion es poliubiquitinar y determinar la degradacion de HIF1¦Á, factor de transcripcion que regula la expresion de genes involucrados en angiogenesis, apoptosis y proliferacion celular. Objetivo:Analizar in silico las caracteristicas estructurales e in vitro las caracteristicas funcionales de la nueva variante L163R. Metodologia:Se emplearon herramientas bioinformaticas y de modelado molecular para predecir y comparar la estructura y propiedades superficiales bajo condiciones representativas de normoxia/hipoxia de L163R y pVHL nativa, evaluandose ademas la energia clasica MM-PBSA de formacion de los distintos complejos. Celulas RCC786-0-VHL-/- parentales o  establemente transfectadas con pBabe-puro-HA-VHL-L163R obtenido por mutagenesis dirigida (RCC786-0-VHL-L163R), fueron utilizadas para ensayos de proliferacion.  Resultados:La estabilidad del complejo formado resulto menor para la variante L163R que para la proteina nativa. In vitro, la proliferacion de RCC786-0-VHLL163R  fue similar a la de RCC786-0-VHL-/- sugiriendo la presencia de una proteina inactiva. Conclusiones: Se logro integrar eficientemente el modelado computacional de los cambios estructurales y de reconocimiento molecular introducidos por la variante L163R con experimentos in vitro para su caracterizacion funcional, permitiendo avanzar sobre su mecanismo molecular de patogenesis.